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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
736
- 英文名:
Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue
- 保质期:
1年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")组织/细胞线粒体分离试剂盒 蛋白质研究,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:组织/细胞线粒体分离试剂盒 蛋白质研究
规格:50T
编号:SY0328
品牌:百奥莱博
英文名:Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue
线粒体是绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器,是细胞的动力工厂,细胞进行氧化磷酸化的场所。因此,对线粒体进行分离,以此为对象,对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。
本试剂盒可用于快速便捷分离组织/细胞线粒体,获得的线粒体纯度较高,且绝大部分都含有完整的内膜和外膜,可用于线粒体的生理功能等方面的研究,得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白,从而用于后续SDS-PAGE、Western、双向电泳及免疫共沉淀等分析。
按照每个样品使用量(细胞1-5×107个;组织:100-200 mg),本试剂盒可分别进行50个个样品的抽提。
试剂盒组份:
试剂A:100ml
试剂B:50ml
试剂C:1ml
储存条件:-20℃,有效期1年。
使用方法
1 线粒体的抽提
1)样本处理
① 组织匀浆:称取100-200 mg新鲜组织,PBS或生理盐水冲洗干净,滤纸吸干,用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1-2.5mL冰预冷的试剂A,混匀,孵育8-10min,匀浆10-30下左右,也可采用超声方法破膜。
② 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 g 离心5-10 min收集细胞。计数,每次提取需要1-5×107个细胞,加入1-2.5mL预冷的试剂A,重悬细胞,混匀,孵育8-10min,可以采用超声或匀浆器方法破膜。
2)将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4 ºC,800 g 离心5 min。
【注】:细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。
3)收集上清液并转移到新的离心管。4 ºC,800 g 再次离心5 min。弃沉淀。
4)将上清液转移到新的离心管。4 ºC,12,000×g 离心10 min,小心去除上清,沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
【注】:离心后的上清含胞浆成分,尽量除去上清。
2 线粒体蛋白的抽提
1)向每毫升预冷试剂B加入10μL试剂C混匀。冰上保存数分钟待用。
2)按每10μL线粒体压积中,加入100μL上述配制好的试剂B/C溶液。
3)置于4℃旋涡振荡15-30 min 。
4)10,000rpm,4℃离心15min,取上清,即为线粒体全蛋白提取物,进行蛋白定量。
5)分装保存于-70℃,避免反复冻融。
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