组织/细胞线粒体分离试剂盒

特别提示：包括组织/细胞线粒体分离试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：组织/细胞线粒体分离试剂盒
英文名称：Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue
产品货号：SY0328
产品规格：50T

线粒体是绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器，是细胞的动力工厂，细胞进行氧化磷酸化的场所。因此，对线粒体进行分离，以此为对象，对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。

本试剂盒可用于快速便捷分离组织/细胞线粒体，获得的线粒体纯度较高，且绝大部分都含有完整的内膜和外膜，可用于线粒体的生理功能等方面的研究，得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白，从而用于后续SDS-PAGE、Western、双向电泳及免疫共沉淀等分析。

按照每个样品使用量（细胞1-5×107个；组织：100-200 mg），本试剂盒可分别进行50个个样品的抽提。

试剂盒组份：
试剂A：100ml
试剂B：50ml
试剂C：1ml

储存条件：-20℃，有效期1年。

使用方法

1 线粒体的抽提
1）样本处理
① 组织匀浆：称取100-200 mg新鲜组织，PBS或生理盐水冲洗干净，滤纸吸干，用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1-2.5mL冰预冷的试剂A，混匀，孵育8-10min，匀浆10-30下左右，也可采用超声方法破膜。
② 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 g 离心5-10 min收集细胞。计数，每次提取需要1-5×107个细胞，加入1-2.5mL预冷的试剂A，重悬细胞，混匀，孵育8-10min，可以采用超声或匀浆器方法破膜。
2）将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4 ºC，800 g 离心5 min。
【注】：细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。
3）收集上清液并转移到新的离心管。4 ºC，800 g 再次离心5 min。弃沉淀。
4）将上清液转移到新的离心管。4 ºC，12,000×g 离心10 min，小心去除上清，沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
【注】：离心后的上清含胞浆成分，尽量除去上清。

2 线粒体蛋白的抽提
1）向每毫升预冷试剂B加入10μL试剂C混匀。冰上保存数分钟待用。
2）按每10μL线粒体压积中，加入100μL上述配制好的试剂B/C溶液。
3）置于4℃旋涡振荡15-30 min 。
4）10,000rpm，4℃离心15min，取上清，即为线粒体全蛋白提取物，进行蛋白定量。
5）分装保存于-70℃，避免反复冻融。

除了组织/细胞线粒体分离试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：真菌(酵母)专用蛋白酶抑制剂
货号：BTN130529
规格：1mL
本产品为酵母细胞蛋白酶抑制混合液，溶剂为DMSO。专门用于裂解各种酵母细胞时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止蛋白质降解。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2. 止蛋白质降解。本产品抑制谱广，能特异性抑制丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天门冬氨酸蛋白酶及金属蛋白酶等各种蛋白酶活性。
3. 本产品为优化的酵母蛋白酶抑制剂混合溶液。与各种细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：蛋白*酸酶抑制剂混合物(100×)
货号：SNM390
规格：1ml

名称：细胞核蛋白提取试剂盒
货号：SNM415
规格：50T

名称：双色预染宽分子量蛋白质Marker(10～170kD)
货号：RFT052
规格：20T(100μl)
本产品包含10种纯化的预染蛋白质组成，分子量范围为10kD-170kD，其中70kD条带为红色，10kD条带为绿色，其余条带为蓝色，可以用于SDS-PAGE和Western Blot转膜时确定未知蛋白的分子量。



使用方法：
1、第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用。
2、-20℃取一管样品，彻底融化，上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
3、电泳结束后，可以直接在胶上观察结果。
4、预染蛋白Marker在不同的凝胶系统中迁移率会有不同，因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小，请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

名称：动物组织蛋白抽提试剂盒
货号：ZN2919
规格：10ml|30ml|100ml
本品对于0.1的组织抽提样品可以抽提100个样，本产品可在60分钟的时间内完成蛋白的提取。

本制品可以从哺乳动物组织样品中温和的抽提总蛋白。该试剂利用温和且可透析的去垢剂裂解组织内的细胞，通过均化作用实现哺乳动物组织样本中的蛋白zuì大溶解效率。该试剂可以根据不同的应用要求在进行细胞裂解之前向其中加入蛋白酶抑制剂、盐、还原剂、螯合剂等。利用该试剂制备的裂解物可直接用于报告基因实验分析，蛋白激酶分析，免疫分析以及蛋白纯化实验等下游分析。使用本试剂对冷冻和新鲜组织提取的蛋白进行验证，证明可以得到较高的蛋白产量。

注意事项：
1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
2.裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不建议用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
3.抽提的可溶性蛋白处于非变性状态，可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程。
4.可透析，确保其与随后的分析系统兼容。

保存：4℃，一年有效。

名称：组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒
货号：HR0155
规格：50T/100T
组织线粒体蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用货号的试剂盒。

储存条件：线粒体试剂AB于2-8℃保存，长期存放于-20℃保存；试剂C和试剂D室温保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从组织中提取蛋白不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● zuì好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce 匀浆器，用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。也可采用超声破碎的方法，建议功率30w，10s。采用普通匀浆器或超声破碎，建议镜检，保证细胞80%以上的破碎率。

1．提取液准备：每200μl试剂C和试剂D中各加入1μl蛋白酶抑制剂混合物混匀备用。
2．取50mg组织样本剪碎。
3．加入 200μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．Dounce 匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
7．取步骤6的上清于另一干净离心管中，加入200μl试剂C 混匀，在4℃，11000×g以上条件下离心5分钟，取上清，即得胞浆蛋白。
8.在步骤6的沉淀中加入200μl冷的试剂B，混匀。
9.在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
10．弃上清。
11.在沉淀中加入80μl-150μl试剂D，置冰上20分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
12．即得线粒体蛋白。
13．将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
【注】：
① 建议用BCA法进行蛋白定量。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。