北京现货YY1-GFP报告基因质粒哪里买

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货YY1-GFP报告基因质粒哪里买，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货YY1-GFP报告基因质粒哪里买
编号：SY0229
英文名：YY1 GFP Reporter Plasmid
品牌：百奥莱博
规格：1μg
YY1-GFP报告基因是用于检测YY1转录活性水平为目的的报告基因。YY1是锌指蛋白类转录因子GLI-Kruppel家族成员之一，主要参与细胞增殖调控、细胞分化以及胚胎发育等。

YY1-GFP报告基因主要应用于YY1信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。

pGMYY1-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个YY1结合位点，可以高效地检测YY1的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得YY1-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM YY1 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMYY1-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

除北京现货YY1-GFP报告基因质粒哪里买外，我公司正在打折促销以下产品：
ARB13602 兔子层连蛋白/板层素(LN)Elisa定量检测 Rabbit laminin,ln ELISA KIT
BL1249 MarkerIDNA Ladder
ARB10037 人I型胶原(Col I)elisa检测说明书 Human collagen type i,col i ELISA KIT
ARB10420 人丙*酸转*酶/谷丙转*酶(ALT/GPT)尿液中含量检测 Human alanine aminotransferase,alt/gpt ELISA KIT
ARB12567 大鼠胶原酶Ⅱ(CollAgenAse Ⅱ)Elisa分析 Rat collagenase type Ⅱ ELISA KIT
ARB12770 小鼠P物质(SP)ELISA检测服务 Mouse substance p,sp ELISA KIT
J0301 兔抗人IgG(H+L)抗血清 1ml/10ml
ARB13698 兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)Elisa分析 Rabbit urokinase plasminogen activator,upa ELISA KIT
BTN101113 柱式软体动物RNAOUT Column Mollusk RNAOUT
BL0617 镍-琼脂糖凝胶H.P Ni Sepharose H.P
超低分子量蛋白Marker(3.3-22KD) 10次
17504-044 B-27无血清添加剂
2-*磷酸*盐 Benzamidine hydrochloride 14463-68-4
ARB13625 兔子神经生长因子(NGF)血清中含量检测 Rabbit nerve growth factor,ngf ELISA KIT
蜗牛酶 t-RNA
PY08-030  一次性改良马丁培养基 10ml  10支/盒，用于药品、生物制品无菌检验
5-*尿嘧啶 Gallic acid 51-20-7
FMOC-L-谷*酰胺 OPA 71989-20-3
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·STAT6-Luc报告基因质粒
编号：SY0145
英文名称：STAT6 Luciferase Reporter Plasmid
规格：1μg
STAT6报告基因是用于检测STAT6转录活性水平为目的的报告基因。信号转导及转录激活蛋白6(Signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)是具有重要意义的一类转录因子，它对白细胞介素4（Interleukin4,IL-4）和白细胞介素13（Interleukin13,IL-13）有应答反应，并且与传导通路的异常活跃与过敏性疾病的发生密切相关。

STAT6报告基因主要检测细胞STAT6信号通路中STAT6的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMSTAT6-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个STAT6结合位点，可以高灵敏度地检测STAT6的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得STAT6报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



使用说明
pGMSTAT6-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。


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·热启动高保真酶
编号：SY0038
英文名称：HotStart Pfu DNA Polymerase
规格：100U
HotStart Pfu DNA Polymerase在Pfu DNA Polymerase的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体，可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR，扩增产物为平端。Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52，是Pfu酶的1/6；且扩增速度可以达到15秒/kb。

本产品中附带的5×HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品组份：
5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃

质量控制：
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-HindⅢ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

使用方法：
1. 所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物，请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20℃。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。

 

ddH2O	to 50 μl
d5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4)	10 μl
d25 mM MgSO4a	optional
ddNTP Mix(10 mM each)b	1 μl
dDMSOc	optional
d5×PCR Enhancerd	optional
d模板DNAe	optional
dForward Primer(10 μM)	2μl
dReverse Primer(10 μM)	2 μl
HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f	1 μl

【注】：
a. 对于大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2 mM Mg2+，如有需要，可用25 mM MgSO4，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
b. 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
c. 扩增子GC含量>60%时加入终浓度3%的DMSO有可能会有助于扩增。
d. 推荐仅当扩增子GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用；可能会降低保真度。
e. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

模板种类/扩增长度	＜1 kb	1 kb～10 kb	＞10 kb
基因组DNA	50 ng～250 ng	100 ng～300 ng	150 ng～400 ng
质粒或病毒DNA	10 pg～20 ng	10 pg～20 ng	1 ng～30 ng
cDNA	1～5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)

f. 推荐的酶的终浓度为1U/50 μl反应。然而，根据扩增子的长度和复杂程度不同，可将HS Pfu DNA Polymerase在0.5-2U/50 μl反应之间进行优化。但请勿超过2U/50 μl，尤其当扩增子长度大于5 kb时。HS Pfu DNA Polymerase具有较强的校对活性。如扩增产物需要进行TA克隆，加A之前必须进行DNA纯化。

2. 推荐PCR反应条件：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	30 sec～3 min	1
变性b	95℃	5～10 sec	25～35循环
退火c	45℃～72℃	10～30 sec
延伸d	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

【注】：
a. 推荐大多数模板的预变性温度为95℃，时间为：质粒或病毒DNA，30 sec，基因组2 min，cDNA 3 min；对于高GC含量模板，预变性温度需提升至98℃，变性时间为2～4 min；对于超过10 kb的扩增子，预变性温度需降低至92℃，变性时间不超过2 min。
b. 对于大多数模板在95℃变性时间设为5～10 sec即可。对于高GC含量模板，变性温度需提升至98℃；对于超过10 kb的扩增子，变性温度需降低至92℃，并延长变性时间至15 sec。
c. HS Pfu DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值±3℃范围内之间即可。如果需要，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板结合的最适温度。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈现弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec即可。对于一些困难模板，退火时间可在10～30sec之间调整。
d. 对于大多数扩增反应，延伸过程可在72℃进行。对于超过10 kb的扩增片段，需降低延伸温度至68℃。延伸时间取决于扩增片段的长度和模板的复杂性。使用质粒等复杂程度较低的DNA做模板时，可使用15 sec/kb的延伸时间；使用基因组
cDNA等复杂程度较高的DNA做模板时，延伸时间应为30 sec/kb。太长的延伸时间会导致非特异性扩增增加，因此延伸时间请勿超过30 sec/kb。

3. 长片段PCR指南：
*使用高质量的模板；
*使用长引物。将引物加长至Tm值68～72℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性；
*适当提高酶量，但50μl反应体系内不要超过2 U；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～6%；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	92℃	2 min	1
变性	92℃	5～10 sec	25～35循环
延伸	68℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	68℃	5～10 min	1

4. 高GC含量模板PCR指南：
*使用高质量的模板；
*提高变性温度至98℃；
*添加DMSO，以1%的浓度递增。调整范围为0%～8%；
*添加5×PCR Enhancer；
*推荐反应条件设置：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	25～35循环
退火	45℃～72℃	10～30sec
延伸	72℃	15～30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5～10 min	1

引物设计注意事项:
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

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