北京逆转录酶价格

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名称：北京逆转录酶价格
规格：5000U
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
本品适用于第一链cDNA合成，cDNA 片段长度最高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。野生型的M-MuLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA，本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶，即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase，与M-MuLV相比，不仅改善了模板RNA可能被降解情况，且具有更强的延伸能力和稳定性，可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。

注意事项

1）为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。
2）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染。
3）如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构，可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀，65℃变性5min，冰上冷却，短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。
4）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用方法

1第一条链cDNA合成（以20μl反应体系为例）
1.1 按照表【1】配制反应体系

 

RNase free ddH2O	to 20μl
5×Reaction Buffer	4 μl
dNTP Mixture (10 mM each)	1 μl
Oligo(dT)18(0.5μg/μl)
or Random hexamer (0.1μg/μl)
or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM)	1 μl
RNase inhibitor (40 U/μl)	0.5 μl
M-MLV (H-) Reverse Transcriptase	1 μl
模板RNA	Total RNA: 50ng-5μg mRNA: 5-500ng
表1 cDNA第一条链合成反应体系表

1.2 轻轻混匀
若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物，42℃孵育50min。
若使用Random hexamer，25℃孵育10min，42℃孵育50min。

1.3 65℃加热15min失活M-MLV (H-) Reverse Transcriptase。

2 RT-PCR
建议取1/10～1/5体积（2～4µl）的反转录产物作为PCR模板。
2.1 按照【表2】配制反应体系表
组分体积终浓度

cDNA模板	2μl	依需要调整
Forward Primer (10μM)	1μl	0.2 μM each
Reverse Primer (10μM)	1μl	0.2 μM each
10×Taq Buffer(含Mg2+)	5 μl	1×
2.5mM dNTPs	4μl	0.2 mM
Taq DNA Polymerase	0.5μl	2.5units
ddH2O to final volume	50μl	/
表2 RT-PCR反应体系表

2.2 按下列条件进行PCR反应：


储存条件：-20℃。

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·细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC/PI)
编号：SY0471
英文名称：Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
规格：20 rxn
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是用FITC标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝*酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝*酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

注意事项

1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝*酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞，比如在检测凋亡的同时检测细胞周期，只能选用Annexin V-FITC，而不能选用Annexin V-EGFP，因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育，并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片，可以和Annexin V结合，对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。


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·*苄青霉素*
编号：SY0287
英文名称：Ampicillin sodiu*(代"m") salt
规格：10g
本品为*苄青霉素*盐，细胞筛选常用的浓度为50-100μg/ml。Ampicillin，中文名*苄青霉素，同义名*苄西林，一种β-内酰胺类抗生素，属于青霉素家族的一员，同样敏感于β-内酰胺酶，后者可裂解*苄西林的β-内酰胺环。Ampicillin广谱抑制革兰氏阳性菌，阴性菌以及厌氧菌，其抑菌机制在于：干扰青霉素结合蛋白（penicillin binding protein，PBP）活性，PBP参与肽聚糖合成的最后一步，其可催化丙*酸和赖*酸残基间形成五甘*酸交联，此交联维持细胞壁的完整性，并维持细菌的正常生长。另外，Ampicillin仅对生长的大肠杆菌（Escherichia col）具有杀菌作用。

Ampicillin普遍用作细胞培养中的一种选择性抗生素，用于配制含*苄的LB或LB平板等，也可用于培养细胞的杀菌。Ampicillin抑制革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，最小抑制浓度（MIC）分别为0.03-3 μg/ml和0.02 - 1.5 mg/ml。高压灭菌的琼脂或培养基需冷却到45-50℃再加入*苄青霉素溶液，含*苄青霉素的平板在2-8℃可保存2周。在 37℃培养条件下，*苄青霉素可稳定3天。

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