Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒等报告基因检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测
品牌：百奥莱博
编号：SY0071
产地：国产|进口
规格：1μg
Nanog荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（Nanog luciferase reporter plasimd）是用于检测Nanog转录活性水平为目的的报告基因。Nanog是近年来在胚胎干细胞（ES细胞）内发现的一个重要转录因子，该因子对维持ES细胞的自我更新及全能性起着关键作用。

Nanog报告基因主要用于检测Nanog在细胞中的表达、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMNanog-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个Nanog结合位点，可以高灵敏度地检测Nanog的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得Nanog报告基因更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1.pGMNanog-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
2.Nanog的激活剂，可作为Nanog报告基因的阳性对照。

储存条件：-20℃。

欲了解更多Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:

·Rb-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号：SY0108
英文名称：Rb luciferase reporter plasmid
规格：1μg
Rb荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（Rb luciferase reporter plasimd）是用于检测Retinoblastoma protein转录活性水平为目的的报告基因。Retinoblastoma protein(Rb)是一种肿瘤抑制蛋白，在多种癌细胞中是发生功能障碍的。Rb是通过抑制处于分裂期细胞的细胞周期进程阻碍细胞的过度增殖。

Rb报告基因主要用于检测细胞中cell cycle信号通路活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMRb-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个Rb结合位点，可以高灵敏度地检测Rb的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得Rb报告基因更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
pGMRb-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

储存条件：-20℃。


Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测关键词：Nanog luciferase reporter plasmid,Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒,SY0071


·通用型全血PCR试剂盒
编号：SY0050
英文名称：Animal Blood Direct PCR Kit
规格：50T
全血直接PCR试剂盒（Blood direct PCR Kit）可以直接对全血样本进行PCR，无需进行DNA纯化或样品预处理，大大降低了污染风险，缩短时间和节约支出。

试剂盒中包含配方优化的2×Blood Buffer，而血液DNA聚合酶专为全血DNA直接扩增而设计，对全血样品中的PCR抑制剂具有超强的抵抗力，可扩增全血浓度高达40%。高度优化的反应体系使得Blood direct PCR Kit能够从全血样品中高效扩增长达10 kb的基因组片段。扩增产物为平端，适用于速克隆试剂盒。另外，试剂盒中配有与哺乳动物和其他许多脊椎动物兼容的引物预混液Positive control primer mix，可用于进行阳性对照反应。

该试剂盒可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903和FTA商用卡上的干血渍，且兼容所有常规抗凝剂 (EDTA、柠檬酸盐、肝素等)。Blood Direct PCR Kit已经在许多哺乳动物物种上进行了成功测试，并成功扩增了几种禽类全血。

产品组份：

 

组分	50T	200T
Blood Super-Fidelity DNA Polymerase（1U/μl）	75 µl	300 µl
2×Blood Buffer	1.25 ml	1.25 ml×4
Positive control primer mix (10 μM each)	50 µl	50 µl
10 mM each dNTPs	50 µl	200 µl
10×Loading buffer	1.25 ml	1.25 ml

储存条件：-20℃。

质量控制：50 μl PCR体系中，以5 μl人全血为模板扩增7.5 kb片段。35个循环后将1/10 PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的7.5 kb条带。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）推荐血液模板使用量为反应总体积的1/10，即50 μl的反应体系内加入5 μl全血。
3）吸取抗凝血，尤其是长期存放过的抗凝血时，应尽量避免吸取血液凝块。
4）延伸时间按30 sec/kb设定，如不足15 sec，设置15 sec即可。超过5 kb片段扩展时，如发现扩增效率较低，可适当延长延伸时间至60 sec/kb。
5）PCR完成后，推荐将反应液于1,000×g (大约4,000 rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。

操作方法

1. 反应体系配制：
所有组分解冻后请充分摇匀，使用完毕后及时放回-20℃。

ddH2O	Up to 50 μl
引物1 (10 μM) a	2 μl
引物2 (10 μM) a	2 μl
10 mM each dNTPs	1 μl
2×Blood Buffer c	25 μl
全血b	5 μl
Blood Super-Fidelity DNA Polymerase（1U/μl）d	1.5 μl

a. 推荐每条引物使用终浓度为0.4 μM，引物使用量太多会导致非特异性扩增增加。
b. 最适全血模板浓度范围为1%～20%，推荐使用10%作为初始尝试条件，尽量避免吸取血液凝块。如果样本是贮存在Whatman滤纸卡上的干血渍，则可取约1mm2带血渍的圆纸片，将其直接放入PCR反应液中，无需预处理。
注1：对于禽类和血细胞中带细胞核的其他物种，可能需要减少用于PCR反应的血量。
注2：全血若短期贮存 (少于3个月)，可置于4℃；若长期贮存，推荐存于-20℃或者Whatman FTA/903卡上。
c. 对于使用全血模板的大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为2 mM。2×Blood Buffer已含有终浓度为2.0 mM 的Mg2+。但Mg2+的最佳浓度会随引物、反应中的血液浓度和所用贮存卡的种类的不同而改变。如推荐反应体系无法正常扩增时，可用25 mM MgSO4，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
d. Blood Super-Fidelity DNA Polymerase是一种带有校对活性的高保真聚合酶，其保真度是普通Taq聚合酶的52倍。该酶中添加了可以在常温下封闭其外切酶和聚合酶活性的单克隆抗体，可进行高特异性的热启动PCR。
注1：Blood Super-Fidelity DNA Polymerase具有较强的校对活性，扩增产物为平末端。如扩增产物需要进行TA克隆，加A之前必须进行DNA纯化。
注2：提高酶的使用量有助于扩增产量的提高，但请勿超过2 U/50 μl。
2. PCR反应条件设置

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	35d
退火b	56℃～72℃	15 sec
延伸c	72℃	30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5 min	1

a. 预变性(95℃，5min)可以让白细胞裂解，释放可用于PCR扩增的基因组DNA。 请勿缩短时间或降低温度。
b. Blood Super-Fidelity DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值即可。然而，使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增，并提高全血模版的扩增效率。因此，如扩增产物特异性较差，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板最适退火温度。推荐退火时间设置为15 sec即可。
c. 延伸时间按30 sec/kb设定，如不足15 sec，设置15 sec即可。超过5 kb片段扩展时，如发现扩增效率较低，可适当延长延伸时间至60 sec/kb。
d. 一般而言，35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加，且有可能会降低扩增保真度。
注：如退火温度高于68℃，可将退火过程和延伸过程合并，进行两步法PCR。温度设定为退火温度(如高于72℃，则设置为72℃即可)，时间设置为30 sec/kb。
3. 扩增产物分析

PCR完成后，建议将反应液于1000×g (大约4000rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要，因为经过PCR循环，反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测，如琼脂糖电泳检测。若需对PCR产物进行酶切分析(PCR-RFLP)，应预先将其稀释2～4倍，以去除存在于PCR反应液中的盐及其它抑制剂对酶切反应的干扰。

4. 对照反应

试剂盒中提供引物预混液Positive control primer mix(10 μM each)用于阳性对照反应。可从哺乳动物及其他许多脊椎动物的基因组中扩增237 bp的片段。该扩增区位于sox21基因的上游，是一段高度保守的非编码区。
Primer #1 (24-mer) 5’- AGCCCTTGGGGASTTGAATTGCTG -3’
Tm: 69.5℃(S=G or C)，使用Primer Premier 5 计算。
Primer #2 (27-mer) 5’- GCACTCCAGAGGACAGCRGTGTCAATA -3’
Tm: 67.9℃ (R=A)，71.5℃ (R=G)，使用Primer Premier 5 计算。
4.1 反应体系

ddH2O	Up to 50 μl
Positive control primer mix (10 μM each)	2 μl
10 mM each dNTPs	1 μl
2×Blood Buffer	25 μl
全血	5 μl
Blood Super-Fidelity DNA Polymerase（1U/μl）	1.5 μl

4.2 PCR反应条件设置

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	35
退火	68℃	15 sec
延伸	72℃	15 sec
彻底延伸	72℃	5 min	1

全血扩增引物设计注意事项

1）引物3’端最后一个碱基选择C或G；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免出现发夹结构；
4）引物Tm值控制在60℃-72℃之间 (推荐使用软件Primer Premier 5进行计算)；
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。


Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒 报告基因检测关键词：Nanog luciferase reporter plasmid,Nanog-Luc荧光素酶报告基因质粒,SY0071

5-*-4*-3-吲哚N-乙酰-β-D-*基半乳糖苷 Alizarin red 129572-48-1
茜素蓝S N-Acetyl-D-tryptophan 66675-89-6
ARB13637 兔子胶原酶I(CollAgenAse I)elisa检测操作说明书 Rabbit collagenase i ELISA KIT
ARB11132 人肽-主要组织相容性复合体复合物(pMHC)定量分析 Human Peptide major Histocomp*(代"a")tibility complex,pmhc ELISA KIT
59865-13-3 CYCLOSPORIN A 环孢霉素A
新型高效T4 DNA连接酶预混液 
琼脂糖凝胶4FF VK4
ARB10433 人甲状旁腺激素(PTH)尿液中含量检测 Human paRathyroid hormone,pth ELISA KIT
BTN81203 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE Running Buffer
Lillie二价铁染色液   2×50ml
PY04-092  甲氧苄*嘧啶乳酸盐  2mg/支×10支  每支添加于100ml Bolton肉汤基础中，用于弯曲杆菌的增菌培养
磷钨酸 Adenine sulfate 12501-23-4

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