内质网蓝色荧光探针(活细胞) 探针标记及检测

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的内质网蓝色荧光探针(活细胞) 探针标记及检测用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多内质网蓝色荧光探针(活细胞)等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：内质网蓝色荧光探针(活细胞) 探针标记及检测
英文名：Endoplasmic Reticulum Blue-White DPX, for live-cell imaging
产地：国产|进口
规格：50μl
品牌：百奥莱博
本系列产品是具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为Blue-White DPX，Ex= 374 nm，Em= 430-640 nm，蓝色荧光，属于DPX家族成员之一。DPX系列染料均具有长发射波长、高吸光系数、高量子产量、较大斯托克司频移等特点。但这些染料具有环境敏感性，会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。

本品为溶于DMSO的1mM Blue-White DPX储存液，推荐工作浓度为100nM-1μM。

分子式：C26H21F5N4O4S
分子量：580.53
外观：Yellow Solution
Ex/Em：374/430-640nm
滤片：DAPI or UV longpass
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月
结构式


关于内质网蓝色荧光探针(活细胞) 探针标记及检测的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·NFAT-GFP报告基因质粒
编号：SY0164
英文名称：NFAT GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
NFAT GFP Reporter Plasmid是用于检测NFAT转录活性水平为目的的报告基因。NFAT(Nuclear factor of activated T-cells)转录因子家族对细胞因子基因和其它一些对免疫反应很关键的基因转录中起关键作用。

NFAT-GFP报告基因主要用于检测细胞PKC/Ca++信号通路中NFAT的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMNFAT-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个NFAT结合位点，可以高效地检测NFAT的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得NFAT-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGMNFAT -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMNFAT-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。

·考马斯亮蓝快速染色液(8分钟)
编号：SY0345
英文名称：Commassie blue fast stain solution (8 mins)
规格：1L
实验室常使用考马斯亮蓝染色法对凝胶上分离的蛋白进行染色，它既克服了*基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。目前广泛用的考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用于蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

本品是基于考马斯亮蓝染色法对蛋白质进行染色而设计的，与传统染色液相比，本品为新型PAGE胶染色试剂，不含甲醇，醋酸等有毒或有刺激性物质，其独特配方使得表面活性剂剥离，蛋白固定，蛋白染色，非蛋白区域着色屏蔽等功能同时进行。8-10分钟即可完成page胶上蛋白染色，无需脱色。染色分辨率与传统染色方法分辨率相当。染色的蛋白带或蛋白点可进行高效电洗脱，适用于蛋白质谱分析。

储存条件：室温，有效期一年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并带一次性手套操作。
2）用本产品4分钟即可显示出蛋白条带，加长染色时间和增加染色次数，有利于提高染色灵敏度。
3）如果凝胶面积增大或者厚度增加，增加染色液和染色时间。
4）切忌长时间高功率加热，否则会使溶液连续沸腾蒸发，造成凝胶干裂。如果不慎使凝胶干裂，可加入 50ml去离子水，高火加热1min，低火加热3-5min，可一定程度恢复干裂的PAGE胶，但染色效果有一定毁坏。

操作步骤

1. 染色工作液的配制
本品是以125×浓缩液的形式提供的，每瓶8ml。
使用前只需要取一瓶8ml的染色原液用去离子水或者蒸馏水稀释到1L，混匀后即为染色工作液，室温保存即可。

2. 染色步骤
1）剥下电泳完毕的SDS-PAGE，或native-PAGE胶，（约10×10cm，厚度小于1mm），放在比凝胶稍大的可微波炉加热的带盖塑料盒中（注意：一定要有盖以防止水汽蒸发过度）；
2） 加入50ml染色液，放入微波炉里先用高火（微波炉最大“火”）加热1分钟，取出染胶盒放在水平摇床上，中速震荡3-5min。倒掉染色液。
3）再加入50ml新的染色液高火加热1分钟，接着用低火（微波上最小“火”）加热染色3-8min。
4）倒去染色液，用清水冲洗掉残余染色液即可观察或拍照，若在旋转摇床上用清水漂洗若干次，可将残余的微弱背景彻底去除。

染色效果图



内质网蓝色荧光探针(活细胞) 探针标记及检测关键词：SY0588,Endoplasmic Reticulum Blue-White DPX, for live-cel,内质网蓝色荧光探针,活细胞,内质网蓝色荧光探针(活细胞)

组织胞浆/胞核分离试剂盒   50T|100T
ARB10658 人血管活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA检测服务 Human vasopeptidase inhibitors,vpi ELISA KIT
ARB14217 大鼠胃泌素(GAs)Elisa分析 
ARB11064 人转甲状腺素蛋白(TTR)elisa检测 Human transthyretin,ttr ELISA KIT
ARB11534 人高尔基蛋白73(GP-73)检测服务 Human golgi protein 73,gp-73 ELISA KIT
3,3,5,5-四甲基联*(代"*")*(代"胺") High range protein MW marker 54827-17-7
ARB12102 大鼠甘油三酯(TG)elisa检测 Rat triglyceride,tg ELISA KIT
2-硫*(代"脲")嘧啶 Basta 141-90-2
F030210 HRP标记山羊抗小鼠IgM抗体 Goat Anti-Mouse IgM*HRP
BTN131140 双脱氧dNTP溶液,10mM ddNTP Solution
锡酸* AA 12058-66-1
PY02-072A  V-P半固体琼脂  250克  
ARB11600 人第八因子相关抗原(FⅧAg)尿液中含量检测 Human factor Ⅷ-related antigen,fⅧag ELISA KIT
L-天冬酰胺一水 IUPAC 5794-13-8
ARB14061 鲑鱼补体蛋白4(C4)ELISA代测服务 Fish c4 ELISA KIT
SJ0007 γ-*基丁酸 γ-Amino butyric acid
ARB11226 人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)Elisa方法检测 Human intercellular adhesion molecule 3,icam-3 ELISA KIT
内质网蓝色荧光探针(活细胞) 探针标记及检测关键词：SY0588,Endoplasmic Reticulum Blue-White DPX, for live-cel,内质网蓝色荧光探针,活细胞,内质网蓝色荧光探针(活细胞)


·通用型全血PCR试剂盒
编号：SY0050
英文名称：Animal Blood Direct PCR Kit
规格：50T
全血直接PCR试剂盒（Blood direct PCR Kit）可以直接对全血样本进行PCR，无需进行DNA纯化或样品预处理，大大降低了污染风险，缩短时间和节约支出。

试剂盒中包含配方优化的2×Blood Buffer，而血液DNA聚合酶专为全血DNA直接扩增而设计，对全血样品中的PCR抑制剂具有超强的抵抗力，可扩增全血浓度高达40%。高度优化的反应体系使得Blood direct PCR Kit能够从全血样品中高效扩增长达10 kb的基因组片段。扩增产物为平端，适用于速克隆试剂盒。另外，试剂盒中配有与哺乳动物和其他许多脊椎动物兼容的引物预混液Positive control primer mix，可用于进行阳性对照反应。

该试剂盒可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903和FTA商用卡上的干血渍，且兼容所有常规抗凝剂 (EDTA、柠檬酸盐、肝素等)。Blood Direct PCR Kit已经在许多哺乳动物物种上进行了成功测试，并成功扩增了几种禽类全血。

产品组份：

 

组分	50T	200T
Blood Super-Fidelity DNA Polymerase（1U/μl）	75 µl	300 µl
2×Blood Buffer	1.25 ml	1.25 ml×4
Positive control primer mix (10 μM each)	50 µl	50 µl
10 mM each dNTPs	50 µl	200 µl
10×Loading buffer	1.25 ml	1.25 ml

储存条件：-20℃。

质量控制：50 μl PCR体系中，以5 μl人全血为模板扩增7.5 kb片段。35个循环后将1/10 PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的7.5 kb条带。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）推荐血液模板使用量为反应总体积的1/10，即50 μl的反应体系内加入5 μl全血。
3）吸取抗凝血，尤其是长期存放过的抗凝血时，应尽量避免吸取血液凝块。
4）延伸时间按30 sec/kb设定，如不足15 sec，设置15 sec即可。超过5 kb片段扩展时，如发现扩增效率较低，可适当延长延伸时间至60 sec/kb。
5）PCR完成后，推荐将反应液于1,000×g (大约4,000 rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。

操作方法

1. 反应体系配制：
所有组分解冻后请充分摇匀，使用完毕后及时放回-20℃。

ddH2O	Up to 50 μl
引物1 (10 μM) a	2 μl
引物2 (10 μM) a	2 μl
10 mM each dNTPs	1 μl
2×Blood Buffer c	25 μl
全血b	5 μl
Blood Super-Fidelity DNA Polymerase（1U/μl）d	1.5 μl

a. 推荐每条引物使用终浓度为0.4 μM，引物使用量太多会导致非特异性扩增增加。
b. 最适全血模板浓度范围为1%～20%，推荐使用10%作为初始尝试条件，尽量避免吸取血液凝块。如果样本是贮存在Whatman滤纸卡上的干血渍，则可取约1mm2带血渍的圆纸片，将其直接放入PCR反应液中，无需预处理。
注1：对于禽类和血细胞中带细胞核的其他物种，可能需要减少用于PCR反应的血量。
注2：全血若短期贮存 (少于3个月)，可置于4℃；若长期贮存，推荐存于-20℃或者Whatman FTA/903卡上。
c. 对于使用全血模板的大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为2 mM。2×Blood Buffer已含有终浓度为2.0 mM 的Mg2+。但Mg2+的最佳浓度会随引物、反应中的血液浓度和所用贮存卡的种类的不同而改变。如推荐反应体系无法正常扩增时，可用25 mM MgSO4，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
d. Blood Super-Fidelity DNA Polymerase是一种带有校对活性的高保真聚合酶，其保真度是普通Taq聚合酶的52倍。该酶中添加了可以在常温下封闭其外切酶和聚合酶活性的单克隆抗体，可进行高特异性的热启动PCR。
注1：Blood Super-Fidelity DNA Polymerase具有较强的校对活性，扩增产物为平末端。如扩增产物需要进行TA克隆，加A之前必须进行DNA纯化。
注2：提高酶的使用量有助于扩增产量的提高，但请勿超过2 U/50 μl。
2. PCR反应条件设置

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	35d
退火b	56℃～72℃	15 sec
延伸c	72℃	30 sec/kb
彻底延伸	72℃	5 min	1

a. 预变性(95℃，5min)可以让白细胞裂解，释放可用于PCR扩增的基因组DNA。 请勿缩短时间或降低温度。
b. Blood Super-Fidelity DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值即可。然而，使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增，并提高全血模版的扩增效率。因此，如扩增产物特异性较差，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板最适退火温度。推荐退火时间设置为15 sec即可。
c. 延伸时间按30 sec/kb设定，如不足15 sec，设置15 sec即可。超过5 kb片段扩展时，如发现扩增效率较低，可适当延长延伸时间至60 sec/kb。
d. 一般而言，35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加，且有可能会降低扩增保真度。
注：如退火温度高于68℃，可将退火过程和延伸过程合并，进行两步法PCR。温度设定为退火温度(如高于72℃，则设置为72℃即可)，时间设置为30 sec/kb。
3. 扩增产物分析

PCR完成后，建议将反应液于1000×g (大约4000rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。该步骤可有效去除多种血液组分。当使用高浓度血液模板时此步尤为重要，因为经过PCR循环，反应管中会存在大量的血细胞碎片。这些碎片会干扰下游的检测，如琼脂糖电泳检测。若需对PCR产物进行酶切分析(PCR-RFLP)，应预先将其稀释2～4倍，以去除存在于PCR反应液中的盐及其它抑制剂对酶切反应的干扰。

4. 对照反应

试剂盒中提供引物预混液Positive control primer mix(10 μM each)用于阳性对照反应。可从哺乳动物及其他许多脊椎动物的基因组中扩增237 bp的片段。该扩增区位于sox21基因的上游，是一段高度保守的非编码区。
Primer #1 (24-mer) 5’- AGCCCTTGGGGASTTGAATTGCTG -3’
Tm: 69.5℃(S=G or C)，使用Primer Premier 5 计算。
Primer #2 (27-mer) 5’- GCACTCCAGAGGACAGCRGTGTCAATA -3’
Tm: 67.9℃ (R=A)，71.5℃ (R=G)，使用Primer Premier 5 计算。
4.1 反应体系

ddH2O	Up to 50 μl
Positive control primer mix (10 μM each)	2 μl
10 mM each dNTPs	1 μl
2×Blood Buffer	25 μl
全血	5 μl
Blood Super-Fidelity DNA Polymerase（1U/μl）	1.5 μl

4.2 PCR反应条件设置

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min	1
变性	95℃	15 sec	35
退火	68℃	15 sec
延伸	72℃	15 sec
彻底延伸	72℃	5 min	1

全血扩增引物设计注意事项

1）引物3’端最后一个碱基选择C或G；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免出现发夹结构；
4）引物Tm值控制在60℃-72℃之间 (推荐使用软件Primer Premier 5进行计算)；
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

我公司强烈推荐探针标记及检测系列产品，热情期待您的咨询选购内质网蓝色荧光探针(活细胞) 探针标记及检测。