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1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibitors
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 蛋白质研究,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 蛋白质研究
英文名:1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibitors
品牌:百奥莱博
规格:100ml
编号:SY0321
本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液(1×),裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。
注意事项
1)本品不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂,使用前请根据实验情况添加合适酶抑制剂。
2)裂解样品的所有步骤均需在冰上或4℃进行。
3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(SY0298)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
(一) 培养细胞样品:
1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂,使PMSF的最终浓度为1mM。
【注】:请根据实验情况选用酶抑制剂。
2)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
(二)组织样品:
1)把组织剪切成细小的碎片。
2)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF等抑制剂,使PMSF的最终浓度为1mM。
【注】:请根据实验情况选用酶抑制剂。
3)按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
【注】:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期12个月。
1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 蛋白质研究极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·人源低密度脂蛋白
编号:SY0445
英文名称:Human Low Density Lipoprotein (Human LDL)
规格:1mg
人源低密度脂蛋白(Human Low Density Lipoprotein, Human LDL),来自健康人源血浆,超速离心纯化获得,通过琼脂糖电泳检测其均匀性和纯度。本产品为无菌包装,可以直接稀释使用。
低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,简称为LDL)由极低密度脂蛋白(VLDL)转变而来,主要功能是把胆固醇运输到全身各处细胞,运输到肝脏合成胆酸,其可用于研究受体介导的内吞作用过程,尤其是在动脉粥样硬化等疾病中,血浆来源的LDL可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。LDL是一个大蛋白,分子量3500 kDa,直径25.8 nm,由20-25%的蛋白质和75-80%的脂类组成。其中脂质部分又由9%游离胆固醇,42%胆甾醇酯,20-24%磷脂和5%甘油三酯共同组成。
除提供LDL之外,我们还提供人源氧化LDL(Ox-LDL),人源乙酰化LDL以及带荧光标记的LDL。
纯度(Purity by Agarose Gel):>98%
浓度 :1.0~4.0 mg/ml
外观:乳状液体
缓冲液组分:0.01 µM EDTA in PBS, pH 7.4
储存条件:4℃,无菌避光,有效期6周
1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 蛋白质研究关键词:SY0321,1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibi,强,1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)
·NRSF-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号:SY0135
英文名称:NRSF Luciferase Reporter Plasmid
规格:1μg
NRSF-Luc荧光素酶报告基因质粒(NRSF luciferase reporter plasmid)是用于检测NRSF转录活性水平为目的的报告基因。NRSF(Neuron-Restrictive Silencer Factor)又被称作REST(RE1-Silencing Transcription factor)主要是在非神经元细胞中阻遏某些神经性基因的表达。随着研究的深入,发现NRSF-REST在神经发育过程中有着复杂的调控功能。
NRSF-Luc荧光素酶报告基因质粒主要应用于Neuron Silencing Factor信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。
pGMNRSF-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个NRSF结合位点,可以高灵敏度地检测NRSF的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得NRSF报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱

使用说明
pGMNRSF-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
储存条件:-20℃。
·30ml重力层析空柱
编号:SY0408
英文名称:Gravity Chromatography Columns
规格:1套
百奥莱博提供的重力层析空柱,适用于多种亲和层析介质的装填,以便于后续相应蛋白的纯化。本品为30ml 重力层析空柱,总装填体积30ml。
储存条件:室温
·基底膜基质胶基底胶(低生长因子)
编号:SY0465
英文名称:Matrigel, Reduced Growth Factor
规格:5ml
Matrigel基底膜/基质胶/基底胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出来的可溶性基底膜制备物,其主要成分由层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、硫*(代"酸")乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等组成,还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。在室温条件下,Matrigel聚合形成具有生物学活性的三维基质,模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能,有利于体外细胞的培养和分化,可用于对细胞形态、生化功能、迁移、侵袭和基因表达等的研究。
Matrigel基底膜/基质胶形成的三维培养基质,可促进上皮细胞、肝细胞、塞尔托利氏细胞、黑色素瘤细胞、血管内皮细胞、甲状腺细胞及毛囊细胞等的贴壁与分化。Matrigel能影响成鼠肝脏细胞和人乳腺上皮细胞三维培养物的基因表达。同时,Matrigel可用作多种肿瘤细胞侵袭研究的基本支架,体内外血管新生研究必不可少的基质,以及体内动物模型移植瘤细胞生长的三维支架。Matrigel还能支持外周神经的新生和牛输卵管上皮细胞的分化。
Matrigel, Reduced Growth Factor(Matrigel RGF)是低生长因子的基质胶,基于标准级别的基底膜/基质胶进一步纯化以去除其内所含的生长因子水平,包括EGF、IGF、FGF、TGF-β 等,其中TGF-β 由于偶联在胶原酶IV上和/或在纯化过程中与胶内的主要成分聚集在一起,浓度降低的相对比较少。本基质胶(低生长因子)适用于更广的细胞培养研究,包括2D/3D培养、血管生成、肿瘤细胞迁移和细胞侵袭、体内肿瘤模型建立等。特别适用于对基质成分更为严格的实验,如信号转导相关研究、阐释生长因子功能的研究或者基因表达研究等。本品为无菌制品,浓度为9-20mg/ml。
储存条件:-20℃,有效期六个月
1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂) 蛋白质研究关键词:SY0321,1×RIPA Lysis Buffer (Strong),without enzyme inhibi,强,1×RIPA裂解液(强)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制剂)
ARB10737 人纤维连接蛋白(FN)酶标法分析 Human fibronectin,fn ELISA KIT
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F010102 小鼠抗乙肝e抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBeAg
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BTN130420 Protein G琼脂糖 Protein G Agarose
精*酸酶(牛肝) Sebacic acid 9000-96-8
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次(对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤)。 加入预冷的 RIPA 液(含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂),RIPA 液的用量:按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注:悬浮细胞,收集
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe: 1.称取 790 mg 的 Tris-Base,加到 75 ml 去离子水中,加入 900 mg 的 NaCl,搅拌
制成1 mg/ml 的储存液,分装,-20℃保存) 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)(用甲醇配制成1 mg/ml 的储存液,分装,-20℃保存) RIPA磷酸(酯)酶抑制剂 激活的Na3VO4(用H2O配制成200 mM 的储存液,见Sodium Orthovanadate Activation Protoco) NaF(200 mM 的储存液,室温保存) 注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂 工作液配制: 配制100 ml 的modified
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