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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
338
- 英文名:
Resgent (Trizol Substitute)
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
4℃避光
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")总RNA提取试剂特价促销,我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商,立足北京,服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门,欢迎各位老师来电垂询订购。
名称:总RNA提取试剂特价促销
编号:QN0927
品牌:百奥莱博
英文名:Resgent (Trizol Substitute)
产地:国产|进口
本试剂是一种通用的总RNA提取试剂,适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提,可有效防止RNA在提取过程中的降解。获得的RNA可直接用于Northern杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase保护实验,RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。该试剂可用于100次总RNA提取(10平方厘米细胞或100mg组织)。
使用方法
自备新开封或专用*仿,异丙醇,75%乙醇,DEPC处理水。
1. 细胞裂解或组织匀浆:
1)贴壁细胞:吸尽培养液,每10平方厘米(6孔板孔或35 mm平皿)细胞加入1ml本试剂,使其覆盖培养细胞,再用吸管或加样器吹打2~3次,细胞应完全裂解,然后转移至离心管中。
2)悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每五百万至一千万(5×106~1×107)动植物或酵母细胞,或一千万 (1×107)细菌,加入1ml本试剂 。用吸管或加样器吹打,使其完全裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,以确保其完全裂解。转移至离心管中。
3)组织:先将组织剪切成小块,放入玻璃匀浆器内。冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。每50~100mg组织加入1ml本试剂 ,匀浆至完全裂解。转移至离心管中。
裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。室温放置5分钟。对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品,匀浆后仍会存留有不溶物质,可12000g 4℃离心10分钟,然后吸取上清至一新的离心管中。
2. 分离:在装有裂解物的离心管中加入0.2倍体积的*仿(1ml本试剂加入0.2ml*仿),振荡器上充分振荡混匀30秒,室温放置2-3分钟。12000g 4℃离心10分钟,然后吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中,每毫升本试剂 约可吸取0.5-0.6ml。有机相和中间层含有DNA和蛋白质,应避免触及。
3. 沉淀:按每ml本试剂加入0.5ml异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10分钟。12000g 4℃离心10分钟,在管底可见RNA沉淀。弃上清,按每毫升本试剂加入1ml 75%乙醇,轻轻颠倒混匀,以清洗RNA沉淀。12000g 4℃离心2分钟,弃去液体,小心勿丢弃RNA沉淀。室温倒置晾干5~10分钟。
4. 溶解:加入适量DEPC处理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。
注意事项:
1,RNA提取过程中所用器皿、离心管、吸头等应保证无污染无RNA酶。操作中应小心,防止外源性RNA酶污染样品导致RNA样品降解。
2,试剂中含有酚等有害物质,注意个人防护。
储存条件:4℃避光,有效期12个月
关于总RNA提取试剂特价促销的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:
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总RNA提取试剂特价促销关键词:总RNA提取试剂,Resgent (Trizol Substitute),QN0927
·SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC显色)
编号:QN1227
英文名称:SABC(Rabbit IgG)-FITC Kit
规格:100T-200T
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验,FITC荧光检测。
试剂盒组份:
封闭液(5% BSA)——————————10ml
Bio-羊抗兔IgG浓缩液-———————100ul
SABC-FITC浓缩液-—————————100ul
稀释液——————————————30ml
抗荧光衰减封片剂—————————10ml
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,SABC大约可形成一百个左右的FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M 柠檬酸*缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10min后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.4)洗涤1-2次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10min,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
3. 滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37℃ 孵育1h左右或20℃ 2h左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2min(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5. 根据使用量,用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗兔IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2min。
6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液,20-37℃孵育30min(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5min。
7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Trxiton X-100室温孵育20min, PBS漂洗两次,接上述第3步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,再接上述第2步。
注意事项:如果背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01%—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后封片观察。
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