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849
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长期
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北京百奥莱博科技有限公司
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2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括鸡肠炎沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.E)北京价格在内的动物疫病PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:鸡肠炎沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.E)北京价格
等级:科研试剂
编号:SYA544
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
规格:48次/盒
我公司的鸡肠炎沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.E)北京价格,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·鼠伤寒沙门菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA061
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·乙型流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA163
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·流感N9亚型病毒(AIV-N9)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA531
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·转基因植物NOS终止子单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA266
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·诺如病毒(NV)通用单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA200
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒针对诺如病毒通用型高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含诺如病毒通用型基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。
二、用途:
诺如病毒(Norwalk Viruses,NV)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus,HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的原型代表株。有5个基因群(Gene group G)GI、GII、GIII、GIV、GV。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行,全年均可发生感染,感染对象主要是成人和学龄儿童,寒冷季节呈现高发。
三、试剂盒组成:(50T/Kit)
组份 数量 规格
RT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(NV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,伯乐系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
1. 采集时间:粪便样本应在发病首日采集,至多不能超过发病急性期(48~72h),此时为稀、软便,病毒排出量最多。
2. 采集方法
(1)一次流行,至少采集10例患者粪便,每份样本量约1~5mL,成形便和肛拭子诊断意义很小;
(2)病人呕吐物是粪便样本的最佳补充,有助于病原的诊断。采集、储存和运送条件同于粪便;
(3)从流行病学角度出发,在水、食物或其它外环境样本中检出NV意义重要;
(4)需注意检测技术要锁定在高度怀疑的传播媒介上,尽早采样并置4℃存放,若是饮用水,需用大容量(5~100L)浓集病毒后检测;
3.应避免样本间交叉污染。
4.样本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于-20℃以下过夜保存;如需长期保存,样本应冻存于-70℃以下,避免反复冻融。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(NV-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM,淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(NV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明NV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明NV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行NV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明NV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
鸡肠炎沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.E)北京价格关键词:SPP.E,百奥莱博,SYA544,鸡肠炎沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.E)
·口蹄疫O型(FMDV-O)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA480
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·人副流感病毒2型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA175
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·水稻转基因Bt63 单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA272
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪流感病毒N2亚型(SIV-N2)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA457
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
·肉毒杆菌8种通用型单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA016
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·腺病毒(ADV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA141
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·肉毒杆菌AB型双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA017
英文名称:Botulinus A/B Fluorescent PCR detection kit
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
本试剂盒适用于检测粪便、水、血液等样本肉毒杆菌(BL) A/B型DNA,用于肉毒杆菌(BL) A/B型感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【原理】
本试剂盒用一对肉毒杆菌(BL)A/B型特异性引物和一条特异性荧光探针,经过裂解提取DNA,后者在Taq DNA聚合酶作用下,配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分,通过PCR-荧光探针体外扩增法对肉毒杆菌(BL) A/B型DNA进行体外扩增,从而达到快速检测肉毒杆菌(BL) A/B型之目的。
【组成】
名称 数量 规格
核酸提取液 1管 2ml/管
Taq 酶系 1管 50μl/管
BL-A/B-qPCR MIX 1管 1000ml/管
BL-A/B -阳性质控品 1管 50μl/管
阴性质控品 1管 250μl/管
【储存条件】-20℃保存,避免反复冻融。
【试剂规格及有效期】48T/盒,有效期6个月。
【适用仪器】
双通道及以上PCR仪器。
【标本采集和保存与运输】
1. 人或动物:
采集新鲜粪便,取黏液脓血部位标本,密闭送检。
2.血液:
采集新鲜抗凝血(非肝素抗凝),密闭送检。
【使用方法】
1. DNA提取
1.1 粪便:挑取米粒大小粪便(尽可能取黏液脓血部分),于放置有0.5ml生理盐水的离心管中,振荡混匀,13000rpm离心2分钟。弃上清,沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀,沸水浴10min,13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
1.2 水标本:取水样3ml,13000rpm离心2min;弃上清,沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀,沸水浴10min,13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
1.3 血液标本:取2ml抗凝血,静置待自然分层,吸取上层(血浆层)及中层(Buffy coat层),13000rpm离心2分钟。弃上清,沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀,沸水浴10min,13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
2.PCR扩增
从试剂盒中取出BL-A/B-qPCR MIX、Taq酶系,室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 BL-A/B-qPCR MIX Taq酶系
用量 20μl 1μl
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μl,向每管中加入处理后样品或BL-阳性质控品和阴性质控品4μl,10000rpm瞬时离心10秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内,推荐循环条件:94℃→2分钟,后94℃ 30秒→55℃ 45秒,40个循环。
荧光通道选择:检测选择FAM通道和HEX/VIC/JOE通道。如果使用ABI系列仪器,请务必在passive reference和quencher处均选择“NONE”。
3. 结果分析判定
FAM通道:Ct值≤35肉毒杆菌A型为阳性;Ct 值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。重复试验之后,如果Ct 值仍然在37-40个循环之间,判断肉毒杆菌A型为阳性,没有荧光值增长肉毒杆菌A型为阴性。
HEX/VIC/JOE通道:Ct值≤35肉毒杆菌B型为阳性;Ct值在35-40个循环之间,为灰区,需要进行重复试验。重复试验之后,如果Ct值仍然在37-40个循环之间,判断肉毒杆菌B型为阳性,没有荧光值增长肉毒杆菌B型为阴性。
【质控标准】
阴性质控品:FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
BL-阳性质控品:FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值均应小于30.0。
以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
【注意事项】
初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
鸡肠炎沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.E)北京价格关键词:SPP.E,百奥莱博,SYA544,鸡肠炎沙门氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒(SPP.E)
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