SYA429型猪流行病腹泻病毒荧光PCR检测试剂盒(PEDV

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

SYA429型猪流行病腹泻病毒荧光PCR检测试剂盒(PEDV)供应是高品质的动物疫病PCR检测试剂盒产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多猪流行病腹泻病毒荧光PCR检测试剂盒(PEDV)等动物疫病PCR检测试剂盒产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：SYA429型猪流行病腹泻病毒荧光PCR检测试剂盒(PEDV)供应
编号：SYA429
产地：国产|进口
规格：48次/盒|96次/盒
等级：科研试剂
品牌：百奥莱博

除SYA429型猪流行病腹泻病毒荧光PCR检测试剂盒(PEDV)供应外，我公司正在打折促销以下产品：

·肉毒杆菌8种通用型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA016
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪流感病毒N2亚型(SIV-N2)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA457
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·水稻转基因Bt63 单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA272
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·人副流感病毒2型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA175
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·口蹄疫O型(FMDV-O)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA480
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·副溶血性弧菌/霍乱弧菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA097
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·疟原虫核酸单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA122
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感H9病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA158
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·牛病毒性腹泻(BVDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA490
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·鼻疽伯克霍尔德菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA800
英文名称：Fluorescent PCR detection kit for 8 kinds of botox
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适用于检测血液、痰、脑脊液、尿、浓性渗出物等样品中的鼻疽伯克霍尔德菌(BP)，用于鼻疽伯克霍尔德菌(BP)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

本试剂盒用一对鼻疽伯克霍尔德菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对鼻疽伯克霍尔德菌进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
BP反应液(BP-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
BP阳性对照(BP-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集：取抗血液、痰、脑脊液、尿、浓性渗出物。

二、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入50uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BP-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
荧光PCR反应液	14µL	N×14µL
酶液	1µL	N×1µL
总量	15µL	N×15µL

向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BP-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

1循环

50℃ for 2 min预变性

1循环

95℃ for 10 minPCR扩增

40循环

95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

四、结果分析：
1．结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
2．试验成立判定
➤阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
➤阳性对照(BP-PTC)：均产生扩增曲线。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
3．结果判定
➤在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明鼻疽伯克霍尔德菌核酸阳性。
➤Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明鼻疽伯克霍尔德菌核酸阴性。
➤如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
➤对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行鼻疽伯克霍尔德菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明鼻疽伯克霍尔德菌核酸阳性；否则判为样本阴性。

五、注意事项：
➤初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
➤所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
➤PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
➤样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
➤试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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·牛口蹄疫亚I型抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA662
等级：科研实验专用
规格：192次/盒|480次/盒

·禽流感H9N1病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA159
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·马源性成分单重荧光PCR检测试剂盒(定量)
编号：SYA305
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

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编号：SYA503
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·肠致病性大肠杆菌(EPEC)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA093
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪伪狂犬野毒病毒(PRV-gE)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA413
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒

·肉毒杆菌B型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA019
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·人副流感病毒2型/4型双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA188
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对人副流感病毒2 型特异性引物，一对人副流感病毒4 型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR 技术对人副流感病毒2 型/4 型RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中人副流感病毒2 型的探针报告基团为FAM，人副流感病毒4 型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中人副流感病毒2型/4型的特异性检测。适用于人副流感病毒2型/4型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
人副流感2型/4型反应液(PIV2/PIV4-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
人副流感2 型/4 型阳性对照(PIV2/PIV4-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(PIV2/PIV4-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 12µL N×12µL
酶混合物 4µL N×4µL
总量 16µL N×16µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N 个PCR 反应管中分别加入16μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PIV2/PIV4-PTC)4μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 30 min
预变性 1循环 95℃ for 5 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测PIV2，VIC/HEX/JOE基团检测PIV4。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
(2) 阳性对照(PIV2/PIV4-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
8.3 结果判定
(1) FAM通道：Ct值≤35 PIV2核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PIV2核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PIV2核酸阳性；否则判为样本阴性。
(2) VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 PIV4核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PIV4核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PIV4核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购SYA429型猪流行病腹泻病毒荧光PCR检测试剂盒(PEDV)供应。