肠致病性大肠杆菌荧光PCR检测试剂盒(EPEC)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的肠致病性大肠杆菌荧光PCR检测试剂盒(EPEC)厂家，是高品质的细菌PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：肠致病性大肠杆菌荧光PCR检测试剂盒(EPEC)厂家
等级：科研试剂
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：SYA093
规格：48次/盒

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等级：科研实验专用
规格：48次/盒

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编号：SYA574
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适合于增菌培养物、疑似病料及组织、血液样本中布鲁氏菌(BS)的特异性检测，用于布鲁氏菌(BS)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

本试剂盒用一对布鲁氏菌特异性引物，对布鲁氏菌DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂盒组成：

 

组份	数量	规格
布鲁氏菌PCR反应液(BS-PCR MIX)	1管	720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
阴性对照(NTC)	1管	50μL/管
阳性对照(BS-PTC)	1管	50μL/管

储存条件：-20℃以下，有效期6个月。

使用方法：

一、样品采集：
➤血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
➤血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
➤粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
➤病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。

二、DNA提取：
可按常规方法提取，也可采用商品化DNA试剂盒提取
➤培养物：取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
➤粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
➤其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

三、检测步骤：
1．试剂的准备
从试剂盒中取出PCR反应液(BS-PCR MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂	每个反应加入的量	N个反应加入的量
PCR反应液	15µL	N×15µL

向设定的N个PCR反应管中分别加入15μLPCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(BS-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
2．qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件：

预变性	1循环	94℃ for 2 min
PCR扩增	35循环	94℃ for 30 sec 58℃ for 30 sec 72℃ for 30 sec

四、结果分析：
➤称取1.5g琼脂糖放于250mL锥形瓶中，加入100mL 1×TAE电泳缓冲液，微波炉加热溶解，稍冷后加入10μL染色液混匀，倒入插有梳子的制胶板中。
➤待胶凝固后，取10μL Maker(推荐使用DL2000 Maker)点样于左侧凝胶孔中，取10μL PCR产物依次点样于凝胶孔中，电压值设定为电泳槽正负极距离(cm)与5(V/cm)的乘积。待*酚兰指示剂电泳至凝胶中部时停止电泳并使用凝胶成像仪或紫外透照台观察结果。

试验成立判定：
➤阴性对照(NTC)：无任何的条带(引物带除外)。
➤阳性对照(BS-PTC)：在260bp处有条带。
➤被检样品：在260bp处有条带为阳性样品，否则为阴性样品。
➤以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。


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规格：48次/盒

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编号：SYA166
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介
本试剂盒用一对甲型流感病毒特异性引物，一对甲型H1N1特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR技术对甲型流感病毒RNA、流感H1N1病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中甲型流感病毒的探针报告基团为VIC/HEX/JOE，流感H1N1病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于检测各种咽拭子、鼻拭子、泄殖腔拭子、组织样品等临床样品中甲型流感病毒和H1N1亚型流感病毒。可用于甲型流感病毒和H1N1亚型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

二、试剂盒组成(48T)
组份 数量 规格
甲型流感/H1N1荧光qRT-PCR反应液(IAV-A/H1N1-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(IAV-A/H1N1-PTC) 1 管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI7500荧光定量PCR检测仪。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 样品RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光RT-PCR反应液(IAV-A/H1N1-RT-PCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1 µL N×1 µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(IAV-A/H1N1-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。总体系20µL。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号 报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测H1N1，VIC/HEX/JOE基团检测IAV-A，淬灭基团均为None，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道全部阴性。
（2） 阳性对照(IAV-A/H1N1-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） FAM通道：Ct值≤35 H1N1亚型流感病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明H1N1亚型流感病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明H1N1亚型流感病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。
（2） HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35 甲型流感病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明甲型流感病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明甲型流感病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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