北京Klenow片段(无外切酶活性)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京Klenow片段(无外切酶活性)厂家在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京Klenow片段(无外切酶活性)厂家
编号：YT510
英文名：Klenow Fragment，Exo-
规格：100U
本酶是没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。

特点：由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3"末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。
用途：5"突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassiu*(代"m") phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment，Exo-失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. 随机引物法进行DNA标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
DNA———————————————————————————————10µl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl
125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl
补充无核酸酶的去离子水——————————————————————至40μl
混匀后沸水浴孵育5-10分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 对于random decamer primer，37℃孵育5分钟；对于random hexamer primer，37℃孵育10分钟。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混匀后37℃孵育5分钟。
e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0终止反应。
f. 取1μl上述液体用于检测标记的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。

2. 双链DNA 5’突出(5’ overhang)末端的标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至20µl
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 30℃孵育15分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

关于北京Klenow片段(无外切酶活性)厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)
编号：YT031
英文名称：Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
规格：10次
本试剂盒是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。

在Klenow酶(Klenow fragment,3"-5"exo-)催化下，通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中，这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中，一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下，通过随机引物标记反应，最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针，可多达1-15倍左右。

本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记，包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用百奥莱博的生物素3"末端DNA标记试剂盒(YT030)进行DNA探针标记。

用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng，推荐的模板用量为100ng-1μg。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA，可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。生物素标记DNA可以使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当试剂盒进行检测。本试剂盒可以用于10个标记反应。

试剂盒组分：

 

Random Primer in Buffer(5X)	105μl
Klenow Fragment	11μl
Biotin-Labeling Mix	50μl
Ultrapure Water	1ml
Biotin-Control DNA(3ng/μl)	50μl
探针标记终止液	100μl

储存条件：-20℃。

使用说明：
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μl。(通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应)
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表：

100ng-1μgDNA模板	xμl
Ultrapure Water	(34-x)μl
Random Primer in Buffer (5X)	10μl
100℃ 5分钟，立即冰浴冷却
Biotin-Labeling Mix	5μl
Klenow Fragment	1μl
总体积	50μl
37℃孵育过夜
探针标记终止液	3μl
-20℃保存
此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测

11. 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：

模板DNA量	生物素标记DNA产量
—	孵育1小时	孵育20小时
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1350ng
100ng	350ng	1650ng
300ng	750ng	2200ng
1000ng	1300ng	2600ng
3000ng	1600ng	2600ng

注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp，平均长度约为300bp左右。


北京Klenow片段(无外切酶活性)厂家关键词：YT510,Klenow片段(无外切酶活性),Klenow Fragment，Exo-


·TNF-α启动子荧光素酶报告基因质粒
编号：YT458
英文名称：TNF-α-promoter-luc Reporter gene plasmid
规格：1μg
TNF-α启动子报告基因质粒是用于检测TNF-α promoter转录活性水平的报告基因质粒。 TNF-α启动子质粒是以pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了human TNF-α的启动子序列(-991bp～+1bp)，可以高灵敏度地检测human TNF-α promoter的激活水平。

TNF-α(Tumor Necrosis Factor α)，中文名为肿瘤坏死因子α，是一种非常重要的炎性细胞因子，在炎性疾病的发生发展过程中起重要作用，常作为炎症反应的重要指标。

pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

TNF-α启动子质粒的主要信息如下：
 

Base pairs	6555
hTNF-αpromoter	20-1010
luc2 reporter gene	1056-2708
SV40 late poly(A)signal	2743-2964
SV40 early enhancer/promoter	3012-3430
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region	3455-4249
Synthetic poly(A)signal	4274-4322
Reporter Vector primer 4(RVprimer4)binding region	4389-4408
ColE1-derived plasmid replication origin	4646
Synthetic Beta-lactamase(Ampr)coding region	5437-6297
Synthetic poly(A)signal/transcriptional pause site	6402-6555
Reporter Vector primer 3(RVprimer3)binding region	6504-6523

TNF-α启动子质粒的图谱如下：



使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. TNF-α启动子质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。
3. LPS等是常见的可以激活TNF-α的转录的试剂，可以用作TNF-α启动子报告基因检测时的阳性对照。

储存条件：-20℃。


北京Klenow片段(无外切酶活性)厂家关键词：YT510,Klenow片段(无外切酶活性),Klenow Fragment，Exo-


·考马斯亮蓝染色脱色液(常规法)
编号：YT058
英文名称：Coomassie Blue Staining Destaining Solution
规格：500ml
本品是用于蛋白凝胶考马斯亮蓝染色后脱色的溶液。本脱色液可以和百奥莱博的考马斯亮蓝染色液(YT057)配套使用。使用本脱色液进行脱色，采用常规脱色方法至少脱色1小时可以观察到蛋白条带；采用快速脱色方法不足20分钟即可观察到蛋白条带。观察到最清晰的蛋白条带则需脱色更长时间。本脱色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。

储存条件：室温，有效期一年。

·小鼠抗GAPDH抗体
编号：YT673
英文名称：GAPDH Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
本品为来源于小鼠的抗GAPDH的单克隆抗体
宿主：小鼠
用途：WB,ICC
交叉反应性：人，小鼠，大鼠
分子量：36KDa
推荐稀释比例：WB(1:1000),IF(1:100),ICC(1:50)
克隆性：单克隆抗体
 

About this Antibody
Name	GAPDH Mouse Monoclonal Antibody
Category	Monoclonal antibody (mAb); Primary antibody
Isotype	IgG2b
Purification	Affinity purification
About the Immunogen
Immunogen	synthetic peptide (KLH-coupled)
Gene ID	2597/14433/24383
SwissProt	P04406/P16858/P04797
Synonyms	GAPDH; G3PD; GAPD; MGC88685
Category	Metabolism
Background	GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) has both glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and nitrosylase activities, thereby playing a role in glycolysis and nuclear functions, respectively. It participates in nuclear events including transcription, RNA transport, DNA replication and apoptosis. GAPDH is a key enzyme in glycolysis that catalyzes the first step of the pathway by converting D-glyceraldehyde 3-phosphate (G3P) into 3-phospho-D-glyceroyl phosphate.

注意事项：
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。

储存条件：-20℃，有效期一年。

我公司生产供应销*(代"售")的工具酶产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购北京Klenow片段(无外切酶活性)厂家。