北京现货细菌膜蛋白质微量提取试剂盒优惠价

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货细菌膜蛋白质微量提取试剂盒优惠价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货细菌膜蛋白质微量提取试剂盒优惠价
规格：50次
产地：国产|进口
编号：BTN100929
英文名：Bacterial Membrane Protein Miniprep Kit
本试剂盒是基于超速离心的快速提取细菌膜蛋白的试剂盒。其原理是裂解细胞后，通过超速离心分离出细胞膜和附着的蛋白质。

产品特点：
1.一步式分离细胞膜和膜蛋白，密度梯度离心法简单快捷。
2. 膜蛋白纯度高，能够去除各种胞浆蛋白的污染，也能去除松散附着在细胞膜上的蛋白，所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好，主要是由于实际中有抑制蛋白酶成分。
4. 回收效率高，一般能得到相当于总蛋白量6%的膜蛋白。
5.可用于E.coli，S.typhimurium，K.aerogens，P.aeruginosa，C.crescentus等细菌。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	125ml
溶液B	25ml
溶液C	250ml
DNase I干粉	3.5mg
说明书	1份

储存条件：低温运输和保存，DNase I 需要低温保存。有效期一年。

使用方法：
准备：第一次使用本试剂盒时需要将所有DNase I干粉倒入溶液B中，轻柔颠倒使DNase干粉溶解。未用完的部分需要放-20℃保存，最好在一个月内完，否则DNase 将逐渐失去活性。此外，最好在实验前1小时将溶液B冰浴预冷。

用法一：小量制备(主要用于上样量比较小的SDS-PAGE电泳等实验)
1．收集20-40mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入2mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入0.5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有20-40mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到新的10mL-15mL塑料离心管中(如Beckman Optima 台式超速离心机离心管)，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入5mL预冷的溶液C，轻柔颠倒混匀后冰浴放置30-60分钟。其间可以轻柔颠倒混匀3-5次。
8．用 Bechman Optima 台式超速离心机115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入0.2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Optima 台式超速离心机 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存，也可以直接加入0.1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×SDS-PAGE上样液中，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度将在1mg/mL左右。

用法二：大量制备(主要用于上样量比较大的2D电泳等实验)
1．收集200-400mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500 g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入20mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有200-400mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到干净的玻璃烧杯中，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入50mL预冷的溶液C，轻轻在冰浴中搅拌混匀30-60分钟。注：可以在大烧杯中装冰，然后将装有样品的小烧杯放入，在放入干净的搅拌子，以最低速度搅拌。
8．用 Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存或溶解在1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×等电点电泳上样液，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度在1mg/mL左右。

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·柱式腐殖酸清除剂
编号：BTN60801
英文名称：Column Humic Acid Scavenger
规格：30次
用绝大多数文献报道的方法从土壤或湖海沉积物中提取的DNA都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用百奥莱博的土壤DNA提取试剂盒从泥碳(腐殖酸含量超过50%)等腐殖酸丰富的土壤样品中提取的DNA也有腐殖酸污染，它们往往对PCR等后续反应有极大的抑制作用。本产品专门用于从土壤DNA样品中清除腐殖酸污染。

产品特点：
1.去污染效果好，能使腐殖酸的浓度降低10倍以上。
2.DNA回收率高，一般都在80%以上。
3.操作过程简单快速，只需要10分钟。
4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。
5.处理后的样品原液或稍微稀释后即可用于PCR。

试剂盒组成：

成分	规格
专用上柱液	9ml
离心吸附柱	30套
通用洗柱液	30ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1.将0.3mL专用上柱液与50μl或50μl以下的含腐殖酸的DNA溶液轻柔混匀。如果DNA溶液体积超过50μl，专用上柱液的体积需按1:6(DNA溶液:专用上柱液)的比例相应增加。不要剧烈震荡，否则DNA容易断裂。
2. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上收集管，放于离心管架上，静置3～5分钟，12000～15000g离心1分钟并倒掉收集管中的液体。若一次加不完，可分两次加入并离心。
3. 加入0.5mL通用洗柱液于离心柱中，12000～15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。
4. 重复第3步操作1次。
5. 12000～15000g离心1分钟以去除离心柱中的残留液体。
6. 将离心柱置于一新的干净的离心管(自备)中，加入50μl通用洗脱液，静置3～5分钟，12000～15000g离心1分钟。
7.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。

使用效果：

图注：从泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本产品处理前(B)和处理后(A)的颜色对比。处理前OD340为4.0(4为所用分光光度计的上限，实际读数可能远高于4)，处理后降低到0.3。处理前的原液、10倍和100倍稀释液均无PCR扩增，而处理后均可以扩增。

疑难解答：
Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大类呈棕黑色或黑色的物质,其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同。有的土壤的腐殖酸的最大吸收波长在260nm(见Appl. Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的则在340nm，所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma，Fluka等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品(已知的不含污染的DNA)能够发生，说明可能有抑制作用。
Q：除本方法外，还有什么有效方法去除DNA样品中的腐植酸？
A：可以先电泳，然后用超大片段胶回收试剂Magic Gel DNArc(BTN60706)纯化DNA，如此得到的DNA原液一般可以直接扩增。
Q：本产品与柱式DNArc有何区别？
A：本产品由柱式DNArc改进而来，主要区别一是使用了不同的上柱液，减少了硅胶膜对DNA的非特异吸附，更适用于微量DNA样品；二是上柱液中含有腐殖酸去除试剂，适合于土壤DNA样品。
Q：在用土壤DNA进行细菌专一性PCR时，为何没加DNA模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。


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·即用型易错PCR试剂盒
编号：BTN101005
英文名称：Instant Error-Prone PCR Kit
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3´→5´校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。

产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：

易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自备DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自备，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
补水到	30μl

2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR	94℃ 1分钟	循环30次(见注)
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。

循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。

PCR循环数	每个碱基突变几率	PCR终产物中的突变位点数
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。

疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。


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乙醇溶液(75%,RNase free)   500ml
H0201 兔血浆(去红细胞、无菌过滤)

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