百万碱基级动物DNA提取试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")百万碱基级动物DNA提取试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：百万碱基级动物DNA提取试剂盒说明书
英文名：Animal DNA extraction kit(Million base pairs)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博

百万碱基级动物DNA提取试剂盒说明书极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·随机引物法DNA探针标记试剂盒
编号：BTN90603A
英文名称：Random Primer DNA Labeling Kit
规格：5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。


百万碱基级动物DNA提取试剂盒说明书关键词：百万碱基级动物DNA提取试剂盒,Animal DNA extraction kit(Million base pairs),BTN130929

91079-40-2 酶水解酪素(酶水解酪蛋白)Casein Enzymatic Hydrolysate
9041-35-4 Sephadex G-25 medium(葡聚糖凝胶G-25)
PY04-107  脱纤维羊血  7ml/支×10支  每支添加于95ml 灭菌冷却至48℃的血琼脂琼脂基础中，用于营养要求较高的细菌培养及溶血试验
改良Bielschowsky神经染色液   5×50ml
ARB10071 人CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)酶标法分析 Human ccaat/enhancer binding protein alpha,c/ebpα ELISA KIT
ARB10440 人甲状腺结合球蛋白(TBG)含量测试 Human thyroxine-binding globulin assay,tbg ELISA KIT
动物细胞核分离试剂盒(Iodixanol梯度法)   50T
CYB162035 羊抗人血清(抗血清) 0.5ml
ARB10024 人5羟色胺(5-HT)elisa检测 Human 5-hydroxytryptamine,5ht ELISA KIT
BTN100847 BCIP-NBT法杂交检测试剂盒 BCIP-NBT DIG Detection Kit
BTN131156 山羊抗兔IgG,异硫*酸荧光素标记 Goat Anti-Rabbit IgG ,FITC Conjugate
2-硝基*(代"*")甲*(代"酸") HMC 552-16-9
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·柱式葡萄球菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130844
英文名称：Staphylococcus RNA Column extraction kit
规格：50次

·RNA溶解液
编号：BTN130505
英文名称：Buffer that dissolves RNA
规格：10mL

·真菌DNA提取试剂盒
编号：BTN60304
英文名称：Fungus DNA extraction kit
规格：50次
本试剂盒是基于液氮研磨法的真菌基因组DNA快速提取试剂盒，尤其适用于从真菌的菌丝体和子实体提取DNA(如果提取孢子和有坚硬细胞壁的单个真菌细胞，则建议选用本公司的玻璃珠法柱式真菌DNA提取试剂盒)，提取过的真菌包括酵母(如：Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pomb、Pichia pastoris)、动物病原真菌(如：Candida albicans、Aspergillus niger)和植物病原真菌(如：Collectotrichum musae、Fusarium oxysporum)。

试剂盒特点：
1. DNA 纯净，OD260/280一般都在1.9左右，可直接用于PCR、酶切、杂交等。DNA大小在50 Kb左右。
2. 操作简单，整个过程约30分钟左右，比大多数同类产品短。
3.液体培养物处理量在0.1-3mL 之间，真菌菌丝、子实体的处理量在0.1-0.5 g 之间。
4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
5. 安全无毒，不需要使用*化苄等有毒物质，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
RNase A溶液(10mg/ml)	0.75ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A最好在4℃保存。
2. 称取0.1-0.5g 湿的真菌菌丝、子实体或0.1-3mL液体培养物离心得到的沉淀，转移到塑料研钵中，液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵，因为DNA 会吸附在表面，影响得率。如果菌丝或子实体等已经十分干燥，则使用量最好比上面推荐的使用量低5-10倍；如果需要预先从环境中对真菌进行纯化(如从血液病原真菌中提取DNA，则需要先去除红细胞等成份)，请按相关的标准方法先将该真菌预纯化出来，以沉淀物的形式放液氮研磨。
3.在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀，需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。
4. 65℃保温5-30分钟，其间最好吹打混匀2-3次。
5. 12000～15000g室温离心3分钟，将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色混浊状，将其置于冰浴中放置5-10分钟。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新离心管中。
8. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
9. 12000～15000g室温离心3分钟，两相交界面将有白色膜状物，小心转移上清到新离心管中。
10. 重复第7-第8 步操作一次。
11. 加入0.6-1倍体积的异丙醇(自备)，上下颠倒30秒混匀，12000～15000g离心5分钟，弃上清，管底将有微小DNA沉淀。
12. 用1mL 70%乙醇清洗沉淀2次后(一次洗涤是指加入70%乙醇震荡，12000～15000g室温离心3分钟，小心吸弃上清)，再短暂离心一次，吸弃残留的液体(约50μL。吸出残留的乙醇很重要，否则它会严重影响后续的电泳上样、酶切、杂交等实验)。
13. 加入50-100μl自备缓冲液(如TE)和5-15μl RNase A溶液溶解沉淀(由于基因组DNA较大，一般需要过夜溶解)。DNA 即可用于电泳，酶切和PCR等反应。如果需要测OD，则必须乙醇沉淀去除降解的RNA。

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