动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)品牌是高品质的细胞及免疫学产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)等细胞及免疫学产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)品牌
英文名：Animal Mitochondria Purification Kit(A)
规格：5次
编号：BTN111207A
产地：国产|进口
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．最后用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，最后再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．最后用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。

除动物线粒体纯化试剂盒A(粗提)品牌外，我公司正在打折促销以下产品：

·生物素化的牛血清白蛋白
编号：BTN131094
英文名称：Biotin-BSA
规格：25mg
本产品为生物素标记的BSA，可在酶联免疫吸附试验、免疫印迹和免疫组化研究中作为对照。本产品以冻干粉末形式提供，每摩尔BSA含有8-12 摩尔生物素。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·考马斯亮蓝R-250
编号：BTN131122
英文名称：Coomassie Blue R-250
规格：10g
考马斯亮蓝R-250是考马斯亮蓝系列染料中的一种。R表示其干粉颜色是蓝色偏红，250表示其纯度。其*盐的分子式是C45H44N3O7S2Na，分子量为826。在酸性条件下，染料的硫*(代"酸")基团能跟蛋白的碱性*基酸结合，故常用于主要用于SDS-PAGE染色。考马斯亮蓝R-250 比G-250少两个甲基基团，不能直接替换使用。


储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·生物素化的蛋白G
编号：BTN131098
英文名称：Biotin-Protein G
规格：0.5mg
本产品为生物素标记的蛋白G，可用于生物素化二抗的替代物。可以检测或定位位于细胞表面或组织中免疫球蛋白。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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11089-65-9 衣霉素 Tunicamycin
BTN100603 银染清除剂 Silver Stain Erasol
ARB12206 大鼠丝*酸/苏*酸蛋白*(代"磷")酸酶(STK)Elisa定量检测 reat serine/threonine protein kinase,stk ELISA KIT
DAPI染色液(1mg/ml)   1ml
ARB10807 人抗甲型肝炎病毒IgG抗体(Anti-HAV)酶标法分析 Human anti-hepatitis a virus igG antibody,anti-hav ELISA KIT
木聚糖 Sodium pyruvate 9014-63-5
美满霉素 Anion exchang resin 13614-98-7
无机磷检测试剂盒(紫外分光光度微板法)   100T
ARB13229 小鼠羟脯*酸(Hyp)酶联免疫定量检测 Mouse hydroxyproline,hyp ELISA KIT
BTN70104 核酸印迹膜染液 Nucleic Acid Membrane Stain
十二烯基丁二酸酐 D-a-Aminoadipic acid 25377-73-5
ARB13661 兔心肌肌*蛋白I(cTn-I)免费代测 Rabbit cardiac troponin i,ctn-iELISA KIT
ARB12673 大鼠雌激素(E)检测服务 Rat estrogen,e ELISA KIT
ARB10764 人抗IgE受体抗体酶标法分析 Human anti-ige receptor antibody ELISA KIT
ARB11816 人膜联蛋白V Elisa分析 Human annexin-Ⅴ ELISA KIT
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·10M*化*溶液(RNase-Free)
编号：BTN100907
规格：250mL

·红细胞裂解液A型(核酸纯化)
编号：BTN60403
英文名称：Red Cell Lysis Solution,Type A
规格：250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性。由于红细胞是血液的主要细胞成份，不含DNA和RNA，其所含血红素能抑制PCR反应，所以先用本产品裂解红细胞，再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点：
1.快速，一次处理只需要2-3分钟。处理后提取血液DNA可以不需要酚/*仿去蛋白质。
2.高效，一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞，一般样品最多只需要处理两次。
3.扩容性好，可以一次处理多达几十毫升的样品，也可以处理100μL的血液。
4. 兼容性好，可以与市场上大多数血液DNA提取试剂盒结合使用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在装有抗凝血液的离心管中，按1:1的比例加入红细胞裂解液A型并轻柔颠倒混匀。
2. 5000-10000 g室温离心2分钟，小心吸弃弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于1/2 体积的红细胞裂解液A型中，轻柔吹打混匀后5000-10000g室温离心2分钟。
4.沉淀即为去除了红细胞的血液细胞，可以直接用于后续的实验。

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