一管式病毒DNA提取试剂盒 DNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")一管式病毒DNA提取试剂盒 DNA纯化，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一管式病毒DNA提取试剂盒 DNA纯化
品牌：百奥莱博
规格：50次
英文名：One-tube virus DNA extraction kit
产地：国产|进口
编号：BTN3674
本试剂盒是专门用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒(如HBV)DNA的产品，其原理是异硫*酸胍/LiCl溶液即能裂解病毒，又能沉淀DNA。本产品灵敏度高，稳定性好，使用简单快捷，尤其适合于整合到临床PCR 检测试剂盒中。

试剂盒特点：
1. 回收率高，可以达到90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高，通过PCR 检测到的最终灵敏度可以达到30-50 拷贝/mL。
3.一管式操作，不使用离心柱，整个操作过程均在室温下完成。
4. 安全无毒，不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
5.处理量大，如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
6.与PCR和荧光PCR 兼容。

试剂盒组成：

 

成分	规格
病毒DNA提取试剂	30ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1.在1.5mL 螺旋盖塑料离心管(最好不要使用压盖式塑料离心管)中加入0.1-0.2mL液体样品。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体在4℃ 24,000g 冷冻离心60分钟，移弃1.3mL后继续操作。
2. 加入0.6mL 病毒DNA提取试剂盒溶液，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。
3. 振荡30秒混匀后加入0.7mL 异丙醇，振荡30秒混匀后，15000g室温离心15分钟。
4. 移弃上清，注意不要触及管底的DNA沉淀，加入1.0mL 70% 乙醇，振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。
5. 移弃上清，注意不要触及管底的DNA沉淀。再短暂离心数秒，移弃残留上清(残留的乙醇会影响后续反应)。此时离心面的管壁上将有可见的膜状沉淀,加入200μl超纯水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀，使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象，如果溶于200μL 水而样品使用量不超过PCR 体系的1/2时，不溶物一般不会影响后续PCR反应。不要离心只取上清使用，因为不溶沉淀物中含有DNA，必须取混合液使用(哪怕很浑浊)。
6.样品可以直接取适量用于PCR，也可保存于-20℃长期保存。

使用效果：

图注：用本产品和市场上某同类产品分别提取0.2mL HBV 阳性血浆(含1000 拷贝/mL HBV)，DNA 溶于200μl 水中，取5μl进行荧光PCR(使用MJResearch的CHROMO4荧光PCR 仪)。红和绿线表示本产品，蓝线表示市场上某同类产品。

一管式病毒DNA提取试剂盒 DNA纯化正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·牛血清白蛋白封堵液
编号：BTN131236
英文名称：BSA Blocking Solution
规格：250mL
本产品可用于所有封闭应用，包含A型Blocker BSA in PBS(10×)和B型Blocker BSA in TBS(10×)。

产品特点：
1．10%高质量牛血清白蛋白溶液。
2．浓缩工艺节省存储空间。
3．液体浓缩液稀释后即可使用，无须等待粉末的溶解。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·一管式点突变试剂盒
编号：BTN100212
英文名称：One-Tube Mutagenesis Kit
规格：10次
基因的定点突变是重要的分子生物学技术，广泛用于载体构建、基因改造、蛋白质功能研究等领域。但传统的方法需要使用单链DNA 模板，而得到单链DNA 模板又需要先将基因克隆到类似M13 这种载体中，操作过程冗长。为了克服这些缺点，本公司将突变位点设计到一对互补的引物中，用高保真扩增质粒模板，然后用Dpn I 去除原始的甲基化模板，新合成的DNA 通过互补形成带切口的双链质粒，直接用于转化感受态细菌。

产品特点：
1. 直接使用质粒DNA作为模板，免去了制备单链DNA的步骤。
2.基于高保真PCR，对模板DNA 序列没特殊要求，可以用于突变任何序列。同时对模板的需求量很少。
3.一管式，全部在一个优化的缓冲体系中完成，非常简单。
4. 使用Dpn I 去除未突变模板，突变效率高达90%。
5.可用于制备点突变，缺失突变和插入突变。
6. 本产品A型适用于8 kb以下，B型适用于8-15 kb。

试剂盒组成：

成分	10T(A型)	10T(B型)
高保真酶A型	10μl	无
高保真酶B型	无	10μl
5×高保真酶Buffer A型	100μl	无
5×高保真酶Buffer B型	无	100μl
dNTP(2.5mM each)	50μl	50μl
Dpn I酶	10μl	10μl
超纯水	1ml	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、引物设计及注意事项
用于特定基因突变的引物必须用户单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计。
1. 共需设计两条完全互补的一对引物，它们覆盖要扩增的突变区位点，突变位点最好放在引物的中心。可以先集中设计一条，然后就可得互补的另一条引物。
2.引物的长度通常为25-45个碱基。引物中突变位点任何一侧都必需满足Tm大于45的条件，Tm 计算方式为Tm=4×(GC 碱基数)＋2×(AT 碱基数)。例如引物agtcaggccaattcgAAGcagtcgaattgccaag 就达到此标准，它的突变位点AAG 所放位置使左侧Tm＝46；右侧Tm＝48，均大于45。
3. 尽量把引物的GC含量控制在40％-60％，结尾的1-3个碱基最好是G或C。
4. 尽量使引物不要产生非常稳定的二级结构和引物二聚体。
5. 最好使用经过PAGE 纯化的引物或更高纯度的引物。

二、待突变模板质粒的选择
1. 必需使用从dam＋的大肠杆菌(这类菌中质粒可以被甲基化)中抽提得到的质粒用于基因定点突变，否则Dpn I 不能把没有酶切的质粒DNA 切除，产生大量的假阳性。常用的大部分大肠杆菌都是dam＋的，包括DH5α、JM109等。不能使用JM110和SCS110以及其它dcm-菌种。
2. 待突变质粒和目的基因的GC含量应该在40-55％，没有任何GC含量超过70%、长度在50bp以上的区域。如果质粒GC含量过高，请先把目的基因克隆到其它合适的载体上，再进行基因定点突变反应。如果目的基因GC含量过高，而突变位点不在高GC含量区域，可以先把该基因的不含高GC含量的一个区域克隆出来，进行定点突变，然后再把突变后的片断克隆回原基因中。如果突变位点在高GC 区，则可以使用高GC 专用PCR反应试剂。

三、基因定点突变反应
1.在一个塑料离心管中加入下列成分：

待突变模板质粒	0.1-0.5μg
5×高保真酶Buffer	10μl
引物一(10-20 uM)	1μl
引物二(10-20 uM)	1μl
dNTP Mix(2.5mM each)	4μl
补水到	49μl

2. 加入1μl高保真DNA聚合酶，混匀，如果PCR仪没有热盖则需要加少量石蜡油。放入PCR仪器中按下面参数进行PCR：

步骤	温度	时间	循环数
变性	95℃	1min	1次
PCR	95℃	40s	18次
	60℃	1min
	68℃	1min/Kb
延伸	72℃	10min	1次
保存	4℃	长时间保持

四、Dpn I消化
PCR反应后，直接在PCR反应体系中加入1μL Dpn I内切酶(该酶在甘油保存液中会下沉到管底，故用前需要充分混匀)。DpnI可以酶切双链都被甲基化的模板质粒，也能降解一条链被甲基化的双链质粒。混匀后37℃孵育2小时后样品可以直接用于转化，或者-20℃保存备用。

五、转化、挑克隆鉴定：
每100 微升感受态细菌(转化效率必须在107/μg以上)中可以加入5-10微升经过Dpn I 消化后的突变产物，按照所使用的感受态细菌的操作方法进行操作。如果PCR 使用了石蜡油，在转化时千万别把它带入转化反应，否则会严重影响转化效率。
在涂板前通过离心浓缩的办法，把所有被转化后的细菌全部涂布到含有适当抗生素的平板上培养过夜。通常会得到50个以下的克隆，可按常规方法制备质粒并测序。

六、常见问题：
1.转化后没有克隆或克隆数极少：
(1)感受态细菌效率不够高，请检测一下感受态细胞的效率，确保转化效率在107/μg。
(2)把Dpn I 消化后的产物用常规的乙醇沉淀浓缩，这样就可以把所有的产物全部用于转化。
(3)优化基因定点突变中的PCR参数。可以把最初的95℃变性时间延长为2分钟，循环中95℃变性的时间延长至1分钟，把循环中的68℃的延伸时间改为1.5分钟/kb 至2分钟/kb，退火可以改为60-55℃或65-55℃等的touch down，退火时间也可以适当延长。
(4)引物设计有问题。通过突变反应中的PCR 没有很好地扩增出预期的突变质粒。
2.有克隆，但没有或很难检测到预期的突变克隆：
使用的待突变的模板质粒量过多，导致Dpn I 消化时不完全，可减少质粒用量。
3. 有突变克隆，但突变位点不是预期的位点：
(1)引物设计不佳，退火温度过低，导致引物退火到错误的地方。
(2)引物质量较差，没有经过PAGE 纯化。这样引物中通常会含有比设计的引物要短的特异性较差的引物，容易导致非预期的突变。


一管式病毒DNA提取试剂盒 DNA纯化关键词：一管式病毒DNA提取试剂盒,One-tube virus DNA extraction kit,BTN3674

PY02-099  沙堡氏琼脂  250克  
ARB12664 大鼠碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA检测服务 Rat basic fibroblast growth factor 4,bfgf-4 ELISA KIT
BL1366 总RNA提取试剂 Trlquick Resgent
67-03-8 VitaminB1    维生素B1
ARB13073 小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)酶联免疫定量检测 Mouse tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,tnfsr-Ⅱ ELISA KIT
ARB10016 人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA代测服务 Human 25-dihydroxy vitamin d3,hvd3 ELISA KIT
ARB12304 大鼠抗胰蛋白酶(AT)检测服务 Rat anti-trypsin,at ELISA KIT
BTN100815 溶菌酶溶液 Lysozyme Solution
73049-73-7 胰蛋白胨 Tryptone
红细胞稀释液(计数用)   100ml
PY02-268A  哥伦比亚琼脂培养基基础  250克  
3,4-二**甲醛 MC 6287-38-3
D-*甘*醇 IBA-K 56613-80-0
ARB10255 人二级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21)血清中含量检测 Human secondary lymphoid-tissue chemokine,slc ELISA KIT
尿素溶液(9.5mol/L)   100ml
一管式病毒DNA提取试剂盒 DNA纯化关键词：一管式病毒DNA提取试剂盒,One-tube virus DNA extraction kit,BTN3674

ARB14014 绵羊补体片段3b受体(C3bR)含量检测 Sheep complement fragment 3b rccptor,c3br ELISA KIT
BTN60803 可保种型蓝白T载体 Blue-White Vector T
XB盐溶液(20×)   100ml
5328-37-0 L-阿拉伯糖 L-Arabinose
ARB11997 大鼠P物质(SP)Elisa分析 Rat substance p,sp ELISA KIT
F030507 FITC标记兔抗卵清蛋白抗体 Rabbit Anti-OVA*FITC
ARB10236 人γ肽(Pγ)含量检测 Human Peptide γ,pγ ELISA KIT
2-脱氧-2-*-D-葡萄糖 Diethyl acetamidomalonate 29702-43-0
6-*乙酸 Fast Black B Salt 4224-70-8
ARB13433 鸡可溶性E选择素(sE-selectIn)酶免分析 Chicken soluble e-selectin,se-selectin ELISA KIT
PY02-034  胰蛋白胨大豆肉汤  250克  
ARB13970 猪胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA检测服务 Porcine insulin-like growth factors binding protein 3,igfbp-3 ELISA KIT
BTN101101 线状DNA清除剂 Linear DNA Erasol
ARB12268 大鼠多巴胺D2受体(D2R)Elisa分析 Rat dopamine d2 receptor,d2r ELISA KIT
002007 肝素*抗凝羊血
BL0627 ConA-琼脂糖凝胶4B ConA Sepharose 4B
30％丙稀酰胺溶液（29:1） 30％ Acylamide Solution(29:1)100ml
N-乙酰-L-蛋*酸 N-(r-L-Glutamyl)-1-naphthylamide 65-82-7
ARB10478 人白介素18(IL-18)尿液中含量检测 Human interleukin 18,IL-18 ELISA KIT

北京百莱博科技有限公司是DNA纯化产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购一管式病毒DNA提取试剂盒 DNA纯化。