一站式DNA非变性PAGE电泳套装供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式DNA非变性PAGE电泳套装供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一站式DNA非变性PAGE电泳套装供应
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop DNA Native PAGE Pack
编号：BTN100205
产地：国产|进口
规格：30次
本品就是专门用于非变性PAGE的试剂。非变性PAGE电泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、单链PCR片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段，因为在非变性PAGE中，DNA的迁移率除跟长短相关外，还跟其构象和结合的蛋白质相关。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备水和样品，十分方便。
2. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
3. 灵活，高浓度的丙*(代"烯")酰胺溶液可用于配制各种浓度的PAGE胶，分开提供的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺可用于配制各种交联度的PAGE胶。
4. PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

产品组成：

 

成分	规格	保存
丙*(代"烯")酰胺	60g	室温
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	2g	室温
TEMED	1.5ml	4℃，避光
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g	室温
非变性PAGE上样液，2×	1ml	4℃
10×TBE(BTN90313)	250ml	室温
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)

一、PAGE浓度的选择：最好使用浓度为5-12%的丙*(代"烯")酰胺胶，因为SSCP-PCR的扩增长度一般在150-200bp之间，而5%的PAGE的有效分辨范围为80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40-200bp。

二、PAGE交联度的选择：交联度越低，孔径越大，对DNA分子构象的变化越灵敏，SSCP分辨率越高，但过低则胶太软，不好进行电泳后的后续操作，所以一般选择1-2%的交联度(即丙*(代"烯")酰胺：甲叉双丙*(代"烯")酰胺在49:1到48:2之间)。

三、体积的选择：SSCP-PCR检测需要长约30-40cm的测序胶板，可以结合梳子的厚度，计算胶的体积。
操作：
1. 配制PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜配制适当交联度29:1的30%的丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(AB溶液，下同)：在本产品提供的装有60 g丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和全部的甲叉双丙*(代"烯")酰胺，充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液溶液和10×TBE缓冲液。丙*(代"烯")酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(单位：ml)			总体积(ml)
	去离子水	30%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	73.4	16.6	10.0	100
6%	70.0	20.0	10.0	100
7%	66.7	23.3	10.0	100
8%	63.3	26.7	10.0	100
9%	60.0	30.0	10.0	100
10%	56.7	33.3	10.0	100
11%	53.3	36.7	10.0	100
12%	50.0	40.0	10.0	100

注：有大量文献报道PAGE胶中加入5%-10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油，则减少去离子水的用量10mL，同时加入10mL甘油。
D：摇晃混匀。最好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
I: 放4℃冰箱预冷30分钟-12小时。为了防止胶收缩，最好顶部加少量1×TBE缓冲液。预冷的胶有利于保持单链DNA的构型。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR样品，加入等体积2×非变性PAGE上样液，85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μl上样。
4.连接电源线，打开电源开关。如果PAGE中不含甘油，则使用25W的功率，电泳5-7小时(对3—40cm长的PAGE胶而言)。如果使用含甘油的PAGE，则使用8W的功率，电泳16-18小时。由于温度变化过大会改变DNA构型，所以电泳时最好能保持恒温。对不含甘油的PAGE，最好恒温在4℃、对含甘油的PAGE，最好恒温在25℃。
5. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。

疑难解答：
一、为何SSCP-PCR带型有复合条带？
原因之一：可能是残留的PCR引物跟单链的DNA结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二：可能是PCR产物用量过高，彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
二、如何提高电泳分辨率？
可以在配胶时加入甘油(终浓度为5%-10%)，因为甘油是弱变性剂，能部分展开DNA折叠结构，增加表面积，增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大，电泳速度变慢，因此只适合室温电泳使用，不要4℃电泳。如果条件允许，最好同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。

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一站式DNA非变性PAGE电泳套装供应关键词：BTN100205,一站式DNA非变性PAGE电泳套装,One-Stop DNA Native PAGE Pack


·甲基化PCR试剂盒2.0
编号：BTN130428
英文名称：Methylation-Specific PCR Kit 2.0
规格：150次
亚硫*(代"酸")*盐修饰DNA时要求DNA必须在单链状态，反应还必须在低温进行，常规的修饰试剂盒由于是在液相进行，要在低温下让DNA 不相互复性而保持单链状态非常棘手，所以常规修饰试剂盒的修饰效率一般都不高。此外，常规方法要切换反应液，有多次沉淀步骤，使得DNA的回收率一般都不超过50%。为克服这些缺点，本公司开发出了此升级产品。


产品特点：
1．用包埋的样品进行所有操作，免去所有沉淀和纯化步骤，极大简化了操作。
2．免去了DNA提取过程，所需实验材料比常规方法更少，最少几个细胞都可以，极大地节约了宝贵材料，尤其适用于珍稀材料。
3．包埋处理后，DNA在整个操作过程中都处于最适于修饰的单链状态，极大提高了修饰效率。
4．DNA 包埋于包埋块中，切换反应液非常方便，而且DNA 不会丢失，所以最终回收率都在90%以上。
5．适用于实体材料、悬浮细胞和纯化好的DNA样品。
6．本试剂盒提供的甲基化修饰试剂盒足够制备150多个10μL包埋块(如果用纯化好的DNA)或25个10μL包埋块(如果用悬浮细胞)；本试剂盒提供的PCR试剂盒足够180次100μL体系的PCR反应。

试剂盒组成：
成分一：甲基化修饰试剂盒(BTN130301)

成分	规格
包埋液	1.5ml
分子生物学级石蜡油	25ml
包埋块裂解液	12.5ml
蛋白酶K溶液(10mg/mL)	150μl
溶液A	30ml
溶液B成分一	2.3 g×5棕色瓶
溶液B成分二	110mg×5棕色管
TE缓冲液，pH8.0	125ml
说明书	1份

注：包埋液用1.5mL旋盖离心管包装，溶液B成分一用5mL棕色瓶包装，溶液B成分二用1.5mL旋盖棕色管包装。
成分二：即用型PCR 3.0(BTN90805)

成分	规格
PCR MagicMix 3.0	9ml
专用染料	360μl
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期一年。但Proteinase K和即用型PCR Mix3.0 需要低温运输，-20℃保存。

使用方法：

一、准备试剂
1．在装有2.3g溶液B成分一干粉的瓶中加入3.9mL水和0.9mL溶液A，摇晃溶解得到4.8mL溶液B成分一。在装有110mg溶液B成分二干粉的离心管中加入1mL 50℃预热的超纯水，摇晃溶解，得到溶液B成分二。将0.6mL溶液B成分二加入到4.8mL溶液B成分一中，得到5.4mL溶液B，冰上放置待用。未用完的溶液B下次不得再使用。
2．每次实验前，将装有1.5mL 包埋液离心管在沸水浴上放置数分钟直到变成溶液，然后放80℃待用。

二、对微量组织材料(如果材料足够，可先纯化DNA，再按第三方案进行)
1．用常规的胰酶消化法处理动物实体组织或培养细胞，得到浓度不超过60细胞/μL的单细胞PBS 悬液。如果实验材料已经是单细胞悬浮液(如卵细胞)，则PBS 洗涤后直接离心沉淀，再重悬在PBS中(浓度不超过60细胞/μL)。注：本试剂盒不含本步所需相关试剂。
2．在一个2mL离心管中加入3μL细胞悬液，再迅速滴加7μL在80℃预热的包埋液。注：不需要吹打混匀以免混合液在抢头里面凝固。
3．加入500μL分子生物学级石蜡油，将离心管在沸冰浴中放置20分钟。
4．将离心管转移到冰上放置30分钟，低温下包埋液和细胞混合液将凝固成10μL的包埋块。
5．加入500μL 包埋块裂解液和5μL Proteinase K溶液，37℃保温过夜。加入的溶液比重都比石蜡油大，将会自动沉降到石蜡油下层，不需离心。
6．吸弃包埋块之外的所有溶液(包括石蜡油)，用1mL TE缓冲液室温浸泡包埋块2次，每次15分钟。此步可去除残留包埋块裂解液。
7．酶切包埋块中的DNA：选定不识别PCR靶片段的内切酶(本试剂不提供该相关试剂)，再用100μL选定内切酶的1×缓冲室温液浸泡包埋块15分钟，吸弃缓冲液后再加入100μL 选定内切酶的1×缓冲液和50U选定的内切酶，37℃保温2小时。
8．吸弃酶切反应液，再加入500μL 新鲜配制的处理液A(配制方法：100μL溶液A+400μL超纯水)室温放置15分钟，重复此步一次。此时DNA 将呈单链。
9．吸弃处理液A，用1mL新鲜配制的处理液B(配制方法：50μL溶液A+950μL超纯水)室温浸泡包埋块5分钟。
10．吸弃处理液B，加入750μL石蜡油，然后沸水浴20-30秒，使DNA单链彻底彼此分开。
11．奖离心管转移到冰上放置30分钟使包埋块重新凝固。
12．在离心管中加入1mL预冷的溶液B，溶液B将自动沉降到石蜡油下层。继续在冰上放置30分钟。此步用于修饰单链的DNA。
13．将离心管转移到50℃放置3.5小时。
14．吸弃溶液B，用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块2次，每次15分钟。
15．吸弃TE缓冲液，用500μL新鲜配制的处理液C(50μL溶液A+450μL超纯水)常温洗涤包埋块2次，每次15分钟。
16．吸弃处理液C，用1mL TE缓冲液常温洗涤包埋块3次，每次10分钟.
17．吸弃TE缓冲液，所得包埋块可以在4℃保存数月待用，也可以用超纯水洗涤两次(每次15分钟)后直接用做100μL体系甲基化PCR的模板。

三、对纯化好的DNA
18．选用不识别PCR 靶片段的合适内切酶酶切纯化的基因组DNA(本试剂不提供所需试剂)，总体积不超过20μL，基因组DNA 不超过700ng。
19．酶切结束后，沸水浴5-10分钟灭活内切酶并变性DNA。
20．冰上放置并短暂离心数秒后，再加入4μL溶液A，50℃保温15分钟。
21．迅速加入50μL在80℃预热的包埋液，用手指快速弹击管底混匀溶液并继续放80℃待用。不要吹打混匀以避免包埋液在移液枪头中凝固。
22．在一个新的、2mL离心管中，加入1mL预冷的溶液B，再加上750mL石蜡油，并将离心管放冰上预冷。
23．迅速取80℃保温的混合液10μL，用在空中滴加的方式加到上步准备的预冷的离心管中，滴加的混合液遇冷将迅速在石蜡油中形成包埋块并自动沉入管底。注意：不要将枪头浸入到预冷的溶液中，否则包埋液将迅速在枪头内凝固。如果包埋块没有沉到管底，可以用枪头将其拨到石蜡层下面的液相中。
24．再重复上步操作，共可以得到7个包埋块(约含100ng DNA)。
25．将离心管(含7个包埋块)继续放冰上30分钟进行修饰。
26．后续操作同第13-17步。

四、甲基化专一性PCR(由于包埋块可能会抑制PCR，所以最好使用100μL体系的PCR进行甲基化检查，如果效果不好，建议使用巢式PCR)
27．在一干净的PCR 管中，加入下列成分(冰上操作)：

成份	样品管	对照管
PCR MagicMix 3.0	50μl	50μl
DNA包埋块(修饰后DNA)	1块(约含100ng DNA)	无
对照DNA(修饰前DNA)	无	100ng
自备MSP引物F	25 pmol	无
自备MSP引物R	25 pmol	无
自备非甲基化PCR引物F	无	25 pmol
自备非甲基化PCR引物R	无	25 pmol
补水到	100μl	100μl

28．将混合物混匀，放入PCR仪中进行热启动PCR，结束后取5-10μL PCR产品直接进行琼脂糖电泳。


一站式DNA非变性PAGE电泳套装供应关键词：BTN100205,一站式DNA非变性PAGE电泳套装,One-Stop DNA Native PAGE Pack

ARB13221 小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)免费代测 Mouse advanced glycation end products,ages ELISA KIT
曙红Y(水溶) CAMP,Na 17372-87-1
丙*(代"酮")酸激酶(PK)定性检测试剂盒(荧光斑点法)   50T
丙*(代"酮")酸* 5′-CMP 113-24-6
517-28-2 苏木色精 Hematoxylin
内源性酶抑制剂(冰冻切片)   100ml
5-尿苷三磷酸三*盐 CHES 19817-92-6
CYB168004 标准新生牛血清 100ml/瓶
ARB13144 小鼠总睾酮(TotAlT)elisa测定使用说明书 
原花青素 Fmoc-Asn(Trt)-OH 4852-22-6
PY08-023  甘露醇卵黄多粘菌素琼脂(MYP)平板 9CM  10皿/盒，用于蜡样芽孢杆菌的固体平板计数
聚氧乙*(代"烯")月桂醇醚 MUG 6540-99-4
BTN130427 丁基硫介质 Butyl-S Medium
ARB13044 小鼠尿素(UreA)免费代测 Mouse urea ELISA KIT
ARB12725 小鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)检测服务 Mouse 25-dihydroxy vitamin d3,hvd3 ELISA KIT
ARB10801 人抗丙型肝炎抗体(抗-HCV)ELISA代测服务 Human anti-hepatitis c virus antibodies ELISA KIT
ARB12415 大鼠细胞色素P4502E1(CYP2E1)Elisa定量检测 Rat cytochrome p450 2e1,cyp2e1 ELISA KIT
BTN81104 超快核酸银染试剂盒 Rapid Silver Stain for Nucleic Acid
维生素D3 Naphthol AS-TR acetate 67-97-0

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购一站式DNA非变性PAGE电泳套装供应。