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- 详细信息
- 文献和实验
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607
- 英文名:
Protein Gel Midi-Extraction Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
蛋白胶中量回收试剂盒促销是高品质的蛋白质研究产品,由北京百奥莱博供应,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多蛋白胶中量回收试剂盒等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:蛋白胶中量回收试剂盒促销
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Protein Gel Midi-Extraction Kit
编号:BTN90403
十二烷基硫*(代"酸")*-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白质技术的微量化,有必要从凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、免疫印迹、*基酸组分分析或末端序列测定等。本产品就是专门为此用途开发的中量蛋白胶回收法。
产品特点:
1.简单,不需要复杂而昂贵的仪器(如电洗脱仪)。
2.适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶。
3.每次可以处理1g的PAGE胶(具体多少蛋白质取决于上样的浓度)。
4.回收率一般在50-90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
5.跟后续的实验兼容,包括2-D电泳、质谱测序等。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 5ml |
| 溶液B | 50ml |
| 20mL塑料注射器 | 5只 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.按常规方法进行变性(SDS-PAGE)或非变性蛋白电泳。
2.切取含目的蛋白的胶(尽可能地把多余的胶切除,否则会影响回收效率)。
注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建议把样品分多孔上样,电泳后只切其中一个样孔的胶条进行固定和染色,然后将此胶条放回到在整体胶中原来的位置,通过显色胶条上的蛋白条带找到在未染色胶上对应区域,并切下此区域的胶进行回收。
3.将切下的、重量不超过1 克的胶块转移到30mL塑料注射器中。
4.用塑料注射器推杆将胶块从端口挤压出去,使之变成细小的碎片,用自备的15mL塑料离心管收集这些破碎的凝胶颗粒。
5.加入1mL溶液A,4℃摇晃洗脱至少2-16小时(过夜)。此时最好将将要使用的溶液B放在冰箱预冷。
6.10000g离心10分钟,转移上清到新的10-15mL的塑料离心管中,注意不要吸取碎胶。
7.加入5倍体积的预冷的溶液B,摇晃混匀。
8.-20℃放置至少10-30分钟。
9.室温12000g(注意:一定要检查使用的离心管是否能够耐受次离心力,如果不能建议将溶液分到1.5mL的塑料离心管中再进行离心处理)离心5-20分钟,弃上清。
10.室温充分晾干,得到的沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D电泳、质谱测序等)。
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蛋白胶中量回收试剂盒促销关键词:BTN90403,蛋白胶中量回收试剂盒,Protein Gel Midi-Extraction Kit
·Poly(A)聚合酶
编号:BTN120509
英文名称:Poly (A) Polymerase
规格:20U
本酶催化在各种多聚核糖核酸的3´末端聚合A碱基的反应。能以单链RNA作引物,双链RNA以及合成的多聚核苷酸、短的寡聚核苷酸等不宜作引物;DNA也不能作引物。本酶因聚合AMP碱基,故只能用ATP作底物,ADP、dATP均不能作为底物。另外,UTP、CTP的掺入不足ATP的5%,而GTP也不能作为底物进行聚合。其反应原理图如下:
本产品的主要用途:
1.在RNA上加上Poly(A)尾。
2.RNA的3´末端标记。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·T7 RNA聚合酶
编号:BTN120310
英文名称:T7 RNA Polymerase
规格:1000U
T7 RNA聚合酶是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5´→3´RNA聚合酶,它可以催化单链或双链DNA T7启动子下游NTP的掺入,合成与T7启动子下游的模板DNA互补的RNA。
产品特点:
1.对于T7启动子有高度的特异性,用于体外RNA(含小RNA)的合成。
2.能识别修饰的NTP(生物素标记、地高*(代"辛")标记、荧光素标记的NTP),可用于标记探针。
3.所得RNA可用于下列后续实验:核酸杂交、基因组DNA序列分析、核糖核酸酶保护测定、反义RNA合成,体外翻译,RNA剪接、RNA二级结构分析、RNA-蛋白质相互作用、核酸扩增、siRNA、miRNA等小RNA。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| T7 RNA聚合酶(20U/μL) | 50μl |
| 5×反应缓冲液 | 250μl |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂,此处信息仅供参考)
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板,但是必须注意以下几点。
⑴必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA,则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
⑵ 需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物,则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上,则需要选择有T7启动子的载体,并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
⑶ 需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒),则最好用T4 DNA聚合酶修平。
⑷必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A,因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染,所以在用作模板前,最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温,然后电泳检测RNA是否被降解,以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应(本试剂盒不含除酶和反应液之外的相关试剂)
1.在一个RNase-free的塑料离心管中,在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分:
| 成分 | 加入量 | 备注 |
| DNA模板 | 如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA | |
| PCR片段 | 50ng左右 | |
| 质粒DNA | 1μg左右 | |
| RNase抑制剂 | ||
| 5×反应缓冲液 | 4μl | 需室温时使用 |
| NTP(2.5mM each) | 4μl | |
| T7 RNA聚合酶 | 0.5-1μL | |
| RNase-free水 | 补水到20μL |
注:此为20μL反应体系的用量,对其他反应体系,各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针,则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA,则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。
2.37℃保温1-2小时。
注意:延长保温时间并不能提高产量。
3.70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。
4.取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成5-10μg的RNA。
5.得到的RNA可以放-80℃保存。
三、如果需要去除DNA模板(仅产品不提供所需试剂)
1.在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2.37℃保温15-30分钟。
3.补水到100μL。
4.用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.加200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀),振荡后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
6.加入1mL 75%乙醇,震荡10秒后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
7.短暂离心数秒,用枪头吸弃上清。晾干,所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。
北京百莱博科技有限公司专业生产蛋白质研究产品,欢迎来电咨询选购蛋白胶中量回收试剂盒促销。
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