土壤基因组DNA提取试剂盒厂家现货

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括土壤基因组DNA提取试剂盒厂家现货在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：土壤基因组DNA提取试剂盒厂家现货
产地：国产|进口
英文名：Soil genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
编号：RFT036
品牌：百奥莱博
本公司的土壤DNA提取试剂盒采用独特的腐殖酸去除液(缓冲液R2)能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。

试剂盒组份：

 

试剂盒组成	50次	贮存方式
缓冲液R1	40 ml	常温
缓冲液R2	6 ml	常温
缓冲液R3	6 ml	常温
缓冲液R4	10 ml	常温
缓冲液 R5	20 ml	常温
漂洗缓冲液WB1	30 ml	常温
漂洗缓冲液WB2 (浓缩液)	13 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	室温
Glass beads	20 g	常温
吸附柱CG	50个	室温
收集管(2 ml)	50个	室温
说明书	1份

准备工作：
1. 准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

标准操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入780μl 缓冲液R1与100μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤， 缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2、加入200μl 缓冲液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用)，涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3、12000 rpm(~13000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180μl 缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
4、冰上放置5分钟。12000 rpm(~13000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
5、加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6、加入350μl 缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7、将上步混合液转移到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。
8、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒，倒掉废液。
9、向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13000g) 离心30 秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000 rpm (~13000g) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11、12,000 rpm(~13000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13000g)离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。

大量操作步骤(针对含微量核酸的样品)
1、称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2、加入600μl 缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3、3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl 缓冲液R4混匀。
4、冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5、以下按标准操作步骤的第五步继续操作。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

常见问题分析：

常见问题	可能原因	建议
没有洗脱出DNA	加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇	样品过柱前，必须用无水乙醇调整核酸结合条件，否则核酸不能挂柱。
	漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低浓度的DNA量	缓冲液R2使用过量	按照步骤1加入适量缓冲液R2
	洗脱体积太小	洗脱体积不能低于50μl，如洗脱体积太小，回收率将大大降低。
	洗涤不恰当	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低A260/A280比率	蛋白污染	不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱
	洗脱液pH值不合适	确保使用的洗脱液pH在8.0以上，如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。
下游应用不好	提取的DNA含盐量高	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。
	提取的DNA含有乙醇	步骤11空甩柱子2分钟非常关键，彻底去除漂洗液中的乙醇。
	抑制PCR反应	增加缓冲液R2用量，彻底去除腐殖酸等PCR抑制因子；步骤4中确保不要吸取到沉淀。

储存条件：室温，有效期12个月。

关于土壤基因组DNA提取试剂盒厂家现货的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·1.5M Tris(pH8.8)
编号：RFT059
规格：100ml|500ml
本品用于SDS-PAGE配制分离胶用。

·卡那霉素硫*(代"酸")盐溶液
编号：RFT179
英文名称：Kanamycine H2SO4 Solution
规格：5×1ml
卡那霉素是一种从Streptomyces kanamyceticus中分离出来的*基糖酐类抗生素。在分子生物学中，卡那霉素常被作为一种蛋白质合成的抑制剂，用于筛选具有卡那霉素抗性基因的克隆。临床上，卡那霉素用于治疗多种细菌的感染，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、结核杆菌等。卡那霉素硫*(代"酸")盐溶液(Kanamycine H2SO4 Solution(10mg/ml)由卡那霉素硫*(代"酸")盐溶于水组成，经0.22μm过滤除菌，可以直接添加到培养基中。一般工作浓度为10～50μg/ml，其中严紧型质粒常采用10 μg/ml，松弛型质粒常采用50μg/ml。

使用方法：
根据实验具体要求操作，一般卡那霉素在LB中终浓度为10～50μg/ml。可以大体按照1/1000 LB体积加入10mg/ml Kanamycin溶液，如100ml LB中加入100μl 卡那霉素硫*(代"酸")盐溶液。

注意事项：
1、尽注意无菌操作，避免污染。
2、避免反复冻融。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃避光，有效期6个月。


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·超低分子量蛋白Marker IV(3.3～45kD)
编号：RFT047
规格：10T(50μl)
本产品包含2种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-45kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。



使用说明：
第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品每次使用前，要95℃加热处理5分钟。

一. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置5-10分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 (一块0.75mm mini胶用量)

	分离胶	浓缩胶
	18％T, 5%C /6.0ml	5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA(19:1)	2.7 ml	/
40% PAA (29:1)	/	0.25 ml
4×多肽电泳凝胶缓冲液	1.5 ml	0.5 ml
乙二醇(电泳级)	1.8 ml	/
ddH2O	/	1.25 ml
10％APS	50-65μl	20μl
TEMED	6μl	2μl

注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置20-30分钟装待凝胶聚合

二. 电泳：
1. 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，95℃加热处理5分钟，充分混匀后备用。
2. 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品(样品已经过2×Tricine上样缓冲液处理)加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。
注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
表二 多肽电泳条件

恒电压	150 V
起始电流	45-55 mA
结束电流	10-15 mA
电泳时间	2-3小时

三. 染色
根据常规实验步骤进行染色和观察。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


土壤基因组DNA提取试剂盒厂家现货关键词：Soil genomic DNA Extraction Kit,RFT036,土壤基因组DNA提取试剂盒

海柯皂苷元 Florfenicol 467-55-0
全血蛋白提取试剂盒 Whole blood protein extraction kit  50T|100T
ARB12286 大鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-FodrIn IgG/IgA)elisa检测 Rat anti-alpha-fodrin igg/iga,α-fodrin igg/iga ELISA KIT
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*化* Phytic acid sodiu*(代"m") salt hydrate 7758-02-3
软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5)   2×50ml
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