BCA蛋白浓度试剂盒说明书

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")BCA蛋白浓度试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BCA蛋白浓度试剂盒说明书
英文名：BCA Protein Assay Kit
产地：国产|进口
编号：RFT057
规格：500次
BCA蛋白浓度测定试剂盒的原理是蛋白质分子中肽键结构在碱性环境下能与Cu2+生产络合物，并将Cu2+还原成Cu+，而BCA试剂可以特异性地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物，并在562nm处有最大的光吸收值，该复合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可以根据吸收值的大小来测定蛋白的含量。本试剂盒可以检测500个样品(使用微孔板)或50个样品(使用试管)。

试剂盒组成：

 

组份	包装	贮存方式
BCA试剂A	100 ml	RT
BCA试剂B	3 ml	RT
牛血清白蛋白(BSA)标准溶液(5 mg/ml)	2×1 ml	-20℃
PBS溶液	10 ml	4℃
说明书	1份

产品特点：
1、灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml(在20-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系)，最小检测蛋白量达到0.2μg，待测样品体积为1-20μl。
2、BCA法测定蛋白浓度的最大优点是蛋白浓度的测定可以耐受高浓度的去垢剂，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。

储存条件：室温，有效期12个月。

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·高分子量蛋白Marker(43～200KD)
编号：RFT049
英文名称：High Molecμlar Weight Protein Marker
规格：20T(100μl)
本产品包含5种蛋白质混合物，分子量范围为43kD-200kD，经过SDS-PAGE电泳，用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带，可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。



使用说明：
1、取Marker样品室温融化，彻底混匀，离心快甩将样品收集到管底。

2、95℃处理5分钟后立即上样电泳。
注：
a.一次热处理后，未用尽样品-20℃保存；下次使用时只要室温完全融化混匀后即可上样，不用再加热处理。
b.上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl，其他规格梳子请适当调整上样量。

3、电泳结束后，染色，观察结果。

注：使用银染时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，可以适当降低Marker上样量。

储存条件：-20℃，有效期6个月。


BCA蛋白浓度试剂盒说明书关键词：BCA Protein Assay Kit,BCA蛋白浓度试剂盒,RFT057


·土壤基因组DNA提取试剂盒
编号：RFT036
英文名称：Soil genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
本公司的土壤DNA提取试剂盒采用独特的腐殖酸去除液(缓冲液R2)能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。

试剂盒组份：

试剂盒组成	50次	贮存方式
缓冲液R1	40 ml	常温
缓冲液R2	6 ml	常温
缓冲液R3	6 ml	常温
缓冲液R4	10 ml	常温
缓冲液 R5	20 ml	常温
漂洗缓冲液WB1	30 ml	常温
漂洗缓冲液WB2 (浓缩液)	13 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	室温
Glass beads	20 g	常温
吸附柱CG	50个	室温
收集管(2 ml)	50个	室温
说明书	1份

准备工作：
1. 准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

标准操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入780μl 缓冲液R1与100μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤， 缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2、加入200μl 缓冲液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用)，涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3、12000 rpm(~13000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180μl 缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
4、冰上放置5分钟。12000 rpm(~13000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
5、加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6、加入350μl 缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7、将上步混合液转移到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。
8、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒，倒掉废液。
9、向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13000g) 离心30 秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000 rpm (~13000g) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11、12,000 rpm(~13000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13000g)离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。

大量操作步骤(针对含微量核酸的样品)
1、称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2、加入600μl 缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3、3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl 缓冲液R4混匀。
4、冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5、以下按标准操作步骤的第五步继续操作。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

常见问题分析：

常见问题	可能原因	建议
没有洗脱出DNA	加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇	样品过柱前，必须用无水乙醇调整核酸结合条件，否则核酸不能挂柱。
	漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低浓度的DNA量	缓冲液R2使用过量	按照步骤1加入适量缓冲液R2
	洗脱体积太小	洗脱体积不能低于50μl，如洗脱体积太小，回收率将大大降低。
	洗涤不恰当	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低A260/A280比率	蛋白污染	不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱
	洗脱液pH值不合适	确保使用的洗脱液pH在8.0以上，如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。
下游应用不好	提取的DNA含盐量高	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。
	提取的DNA含有乙醇	步骤11空甩柱子2分钟非常关键，彻底去除漂洗液中的乙醇。
	抑制PCR反应	增加缓冲液R2用量，彻底去除腐殖酸等PCR抑制因子；步骤4中确保不要吸取到沉淀。

储存条件：室温，有效期12个月。


BCA蛋白浓度试剂盒说明书关键词：BCA Protein Assay Kit,BCA蛋白浓度试剂盒,RFT057


·2×Taq PCR MasterMix
编号：RFT095
规格：500μl|5×500μl
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可最大限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。适用于常规PCR反应、复杂模板(如GC含量高，有二级结构)的扩增以及大规模基因检测。使用该产品得到的PCR扩增产物末端含有一个A碱基，可以直接用于TA克隆。以50μl PCR反应体系为例，每次使用25μl 2×MasterMix，500μl可做20次 50μl PCR反应。

质量控制：经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余基因组DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

	50μl反应体系	终浓度
2×MasterMix	25μl	1×
上游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
下游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
模板	×μl	10pg-1μg
水	补至50μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
最后延伸	72℃	5 min	1

*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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