细胞周期与凋亡检测试剂盒品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

细胞周期与凋亡检测试剂盒品牌是高品质的细胞凋亡与增殖产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多细胞周期与凋亡检测试剂盒等细胞凋亡与增殖产品请联系我司咨询订购。

名称：细胞周期与凋亡检测试剂盒品牌
英文名：Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit
规格：50次
品牌：百奥莱博
编号：WE0326
  细胞周期与凋亡检测试剂盒是一种采用经典的碘化丙啶染色方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。本试剂盒每个样品的细胞数量可以为10-100万。
  碘化丙啶是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
  本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Dyeing Buffer	22.5ml
25×Propidium Iodide，PI	750μl

注意事项：
1、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
2、需自备PBS、95%乙醇和RNase A。
3、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4、PI对人体有刺激性，请注意适当防护。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

2、细胞固定：
取4毫升冰浴预冷的95%乙醇，低速涡旋震荡的同时加入1毫升细胞悬液，混匀后4℃固定2小时或更长时间。固定12-24小时可能效果更佳。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的乙醇，以避免吸走细胞。加入约5ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3、PI染色液的配制：
参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的PI染色液：

	1个样品	6个样品	12个样品
Dyeing Buffer	0.4ml	2.4ml	4.8ml
25×Propidium Iodide，PI	15μl	90μl	180μl
RNase A(10mg/ml，自备)	1μl	6μl	12μl

注：配制好的PI染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。

4、染色：
每管细胞样品中加入400μl PI染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。

5、流式检测和分析：
用流式细胞仪在激发波长488 nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

储存条件：-20℃，避光保存

细胞周期与凋亡检测试剂盒品牌极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·无RNA酶水
编号：WE0217
英文名称：RNase-Free Water
规格：100ml
本品为不含RNase的水，常用于RNA的提取纯化、RT-PCR等分子生物学实验。

·T4 DNA聚合酶
编号：WE0238
英文名称：T4 DNA Polymerase
规格：150U|750U
  本产品是由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。由于T4 DNA聚合酶同时具有5’→3’ DNA聚合酶活性和3’→5’ DNA外切酶活性，可以用于将5’端突出末端补平或3’端突出末端削平，也可用于通过置换反应进行标记DNA探针合成、通过引物伸长法解析mRNA转录的起始点、定点突变过程中第二链的合成以及不依赖于连接反应的PCR产物克隆等。本T4 DNA聚合酶的3’→5’ DNA外切酶活性比Klenow Fragment要高约100-1000倍，且对于单链DNA要比双链DNA活性更高。本酶不含5’→3’DNA的外切核酸酶活性，于70℃加热10分钟可使其失活，金属离子螯合剂可以抑制其活性。

·组织蛋白抽提试剂盒
编号：WE0260
英文名称：Tissue Protein Extraction Kit
规格：25次|100次
  本试剂盒应用于组织样本的总蛋白提取。提取蛋白之前可根据具体实验需要加入蛋白酶抑制剂、盐、还原剂、螯合剂等成分。使用该提取液提取的组织蛋白，可进行蛋白活性分析、免疫检测、蛋白纯化等下游操作，并可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

组份	25次	100次
Tissue Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品适用于提取心肌、骨骼肌、肾脏、前列腺、皮肤、结肠、肝脏等软组织。
2、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
3、使用本产品提取蛋白后，可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。
4、为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。

使用方法：
1、请在实验前取出Tissue Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、取适量Tissue Protein Extraction Reagent，抽提蛋白2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
3、1 g组织加入10ml 1×工作液匀浆处理(抽提试剂的使用量可根据组织不同而调整)。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
4、冰上孵育20分钟(冰上放置时间可根据组织不同而调整)。
5、10000×g 离心15-20分钟。
6、转移上清至新管中，进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。

储存条件：-20℃


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·Rosetta(DE3)感受态细胞
编号：WE0250
英文名称：Rosetta(DE3)Competent Cell
规格：100μl×10支
  本产品是采用进口Rosetta菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。Rosetta菌株是携带*霉素抗性质粒BL21的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

产品组成：

组份	0.1ml×10支
Rosetta(DE3)Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。


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·抗VSV-G标签单克隆抗体
编号：WE0340
英文名称：Anti VSV-G-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：20μl
疱疹性口炎病毒(VSV)属于弹状病毒家族，在出芽过程中从宿主细胞的细胞膜中释放出来，糖蛋白(VSV-G)包含一个区域，该区域的细胞膜外近端是作为VSV病毒出芽所必需的结构。VSV-G标签抗体能识别C末端，内部以及N末端的VSV-G标签(YTDIEMNRLGK)融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成多肽(YTDIEMNRLGK)
应用范围：WB(1：500-5000)、ELISA(需摸索最佳稀释度)

·生物素化驴抗人IgG(H+L)
编号：WE0371
英文名称：Donkey Anti-Human IgG,Biotin Conjugated
规格：100μl
本产品为生物素标记的经亲和纯化的驴抗体，特异识别人IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，对其他种属IgG无明显交叉反应。生物素(Biotin)与链霉亲和素(Streptavidin，SA)具有极高的亲和力，反应呈高度专一性。每个链霉亲和素分子具有4个生物素分子结合位点，因此，链霉亲和素可同时以多价形式结合生物素。生物素化的抗体与辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的链霉亲和素联合使用，将检测信号级联放大，最后通过显色反应或化学发光可检测到微量蛋白。

免疫原：人IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
应用范围：
WB 酶链亲和素检测(1：20000-400000)
ELISA(1：20000-400000)
Enzyme immunohisto/cytochemistry(1：500-5000)
Fluorescence Immunohisto/cytochemistry(1：200-1000)
Flow cytometry(1：200-1000)

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