北京人二硫键异构酶厂家

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京人二硫键异构酶厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京人二硫键异构酶厂家
英文名：Human Disulfide Isomeras
产地：国产|进口
规格：1mg
编号：BTN130868
二硫键异构酶(PDI)，一种内质网滞留蛋白，为多功能蛋白质，参与新合成的分泌性蛋白质的修饰和折叠，催化硫醇-二硫键交换反应，形成二硫键，促进蛋白质的再折叠。原理如下：


储存条件：低温运输，-70℃保存，有效期一年。

活性单位定义：在25℃，pH7.5的条件下，15分钟使1 RNase A U*活性恢复所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
*1 RNaseA U：以cytidine2’,3´-cycline monophosphate为底物，在25℃，pH7.5的条件下，1分钟使284nm的吸光度增加0.001，酶活性定义为1RNase A单位。

更多有关北京人二硫键异构酶厂家的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·非酶RNA清除剂1.0
编号：BTN51203
英文名称：Non-enzymatic RNA scavenger 1.0
规格：1.5mL
本品为非酶法质粒RNA和蛋白质污染的去除试剂，专用于从碱变性法纯化的质粒中去除其中的绝大部分RNA污染和大部分蛋白质污染。

产品特点：
1.高效，能去除质粒粗提物中80%左右的RNA污染和60%的蛋白污染。而常用的RNase或LiCl处理只能去除RNA，不能去除蛋白质污染。
2.快速，整个过程只需要十余分钟，不需要37℃保温。
3. 经过本产品处理过的样品，由于没有RNA和蛋白质的干扰，使用硅胶膜或其他吸附离心法吸附、回收质粒DNA的效率比没处理过的样品更高。
4. 价格不到RNase A的1/2，在质粒的大规模制备时成本优势更加明显。
5. 制备临床用(如基因治疗)的质粒DNA时，可以减少后期在临床报批、生产、质检和使用中的很多麻烦(使用生物来源的RNase A和蛋白酶时，容易带入对人体有害的内毒素、LPS等污染物)。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一、从碱变性澄清液中去除RNA和蛋白质
1. 将约1/5体积的RNA Scavenger加入到碱变性澄清液中(加溶液III后离心得到的上清液一般是450μl，所以需要加入50μl)。
2. 混匀后室温放置10分钟。
3.室温8000g离心10分钟。
4.转移上清到一新的离心管中，后续处理跟经典的方法一样(即加入等体积的异丙醇或两倍体积的乙醇,混匀后室温离心10分钟,弃上清液后用1mL 75%乙醇洗一次,短暂离心，去掉残留液体,加入适量TE缓冲液溶解质粒待用)。

二、从质粒粗提液中去除RNA和蛋白质
1、将1/4体积的RNA Scavenger-1直接加入到已经溶解在TE或其他溶解液的质粒DNA中。
2、混匀后室温放置10分钟。
3、室温8000g离心10分钟。
4、转移上清到一新的离心管中，加入等体积的异丙醇或两倍体积的乙醇。
5、混匀后室温离心10分钟。
6、弃上清液后用1mL 75%乙醇洗一次。
7、短暂离心，去掉残留液体。
8、加入适量TE缓冲液溶解质粒待用。

使用效果：

图注：用经典的碱变性法从1.5mL E.coli过夜培养液中提取的pGEM-3质粒粗提物(加溶液ⅡI离心上清)经过RNA Scavenger处理后(LA+RNA Scavenger)与未经处理的样品(AL)电泳比较。上样量为1/5。

图注：用经典的碱变性法提取的pGEM-3质粒DNA溶于TE中后，经过RNA Scavenger处理的(+)与未经处理的(-)样品进行电泳比较。处理过的样品失去80%左右的RNA。

疑难解答：
Q：电泳检测质粒DNA时也需要将其RNA污染去掉吗?
A：是。否则RNA 将结合大部分的EB溶液,使质粒DNA的带型减弱。
Q：RNA Scavenger-1跟RNA Scavenger-2 有何区别？
A：
1. RNA Scavenger-2处理过的样品不再需要醇/盐沉淀处理，而RNAScavenger-1处理的样品还需要醇/盐沉淀去除RNA Scavenger-1；
2. RNA Scavenger-2与柱式硅胶膜纯化方法兼容，而RNA Scavenger-1 不兼容；
3. RNA Scavenger-2 不但可以用于去除质粒DNA的RNA污染，还可以用于去除基因DNA的RNA污染，而RNA Scavenger-1只能用于质粒DNA样品。


北京人二硫键异构酶厂家关键词：人二硫键异构酶,BTN130868,Human Disulfide Isomeras

吐温85 Sodium D-gluconate 9005-70-3
PMSF   1ml|10ml
7365-45-9 HEPES  N-2-哌*(代"嗪")-N"-2-乙磺酸
J0202                  兔抗鸡卵清蛋白抗血清                             
DL-丝*酸 DIPSO 302-84-1
麦芽四糖 Dodecenylsuccinic anhydride 34612-38-9
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测试剂盒(PVS比色法)   50T|100T
4.1-66kDa低范围分子量MARK Tylosin tartrate
ARB13429 鸡马立克氏病病毒(Chicken MDV)Elisa方法检测 
BTN120414 DNA拓扑异构酶I DNA Topoisomerase I
ARB13614 兔子细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)免费代测 Rabbit intercellular adhesion molecule 1,icam-1/cd54 ELISA KIT
ARB14100 人精浆弹性硬蛋白酶检测服务 
BL0955 胶体金标记兔抗山羊IgG抗体
ARB12531 大鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)elisa检测 Rat oxidized lowdensity lipoprotein antibody,olab ELISA KIT
北京人二硫键异构酶厂家关键词：人二硫键异构酶,BTN130868,Human Disulfide Isomeras


·一站式GST标记蛋白质微量纯化套装
编号：BTN111116A
英文名称：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
规格：20次
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。

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