北京现货T7 DNA聚合酶(未修饰)供应

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货T7 DNA聚合酶(未修饰)供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货T7 DNA聚合酶(未修饰)供应
英文名：T7 DNA Polymerase(Unmodified)
产地：国产|进口
编号：BTN130618
品牌：百奥莱博
规格：300U
T7 DNA聚合酶催化在感染过程中T7噬菌体DNA的复制。该蛋白二聚体具有两种催化活性，DNA聚合酶活性和较强的3´→5´核酸外切酶活性。由于该酶具有高保真性和快速延伸速率，因而特别适于长链DNA模板的复制。T7 DNA聚合酶由两个亚基组成，T7基因5蛋白(80kDa)和E.coli硫氧还蛋白(1kDa)。这两个蛋白分别克隆并在E.coli的T7表达系统过表达。

产品特点：
1．缺口填充(无链置换活性)。
2．定点突变中第二链的合成。
3．具有快速延伸的特性，故无需长时间温育。
4．T7 DNA聚合酶不能用于DNA测序。

产品组成：

 

成分	规格
T7 DNA聚合酶(10U/μL)	30μl
10×T7 DNA聚合酶反应缓冲液	1.5ml
BSA溶液(10mg/mL)	0.25ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：对于不同的实验，各成分用量及反应时间可能不同，请根据具体实验具体调整。1×T7 DNA聚合酶反应缓冲液，加入0.05mg/mL BSA和自备的dNTPs，37℃温育。

热失活：75℃下反应20分钟。

单位定义(粘性末端活性单位)：1 单位指在37℃条件下反应30分钟，能使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物中所需的酶量。

贮存液成分：50mM KPO4，1mM DTT，0.1mM EDTA，50%甘油，pH7.0@25℃。

想要了解更多关于北京现货T7 DNA聚合酶(未修饰)供应的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·电泳级β-巯基乙醇
编号：BTN100841
英文名称：b-Mercaptoethanol，EG
规格：1.5mL
本产品是电泳级的b-巯基乙醇原液，专门用于SDS-PAGE蛋白质变性电泳。在过量b-巯基乙醇存在时(一般为5%)，它能够打开蛋白质的二硫键，使蛋白质的在SDS-PAGE胶中的泳动速度只取决于分子大小。如果没有足够的b-巯基乙醇，具有二硫键的蛋白质在SDS-PAGE电泳中的分辨率将会出现鬼带。本产品可以用于制备SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE上样液，也可以用于补充上样液中挥发的巯基乙醇。

SDS和b-巯基乙醇在SDS-PAGE蛋白变性电泳中的作用：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

β巯基乙醇还原反应示意图：



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·长效期SDS-PAGE还原剂
编号：BTN100910
英文名称：SDS-PAGE Reducing Agent
规格：10mL
在蛋白质PAGE电泳中，还原剂的作用是打断二硫键，可以使蛋白质变性。但是在常规的SDS-PAGE中只有上样液中含有还原剂，PAGE胶中并没有还原剂，蛋白质会在电泳过程中重新形成二硫键，因此电泳条带不清晰。本产品可以克服蛋白电泳此缺点。将本品加入到电泳液中，使蛋白在电泳过程中无法重新形成二硫键。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·红细胞裂解液B型(流式细胞分析用)
编号：BTN90309
英文名称：Red Cell Lysis Solution,Type B
规格：250mL
本品用于快速裂解哺乳动物全血中的红细胞而基本不破坏白细胞和其他淋巴细胞的完整性和生物学活性。由于红细胞是血液的主要细胞成份，不含DNA和RNA，其所含血红素能抑制PCR反应，所以先用本产品裂解红细胞，再提取基因组DNA或RNA 有助于提高所得样品纯度。

产品特点：
1.可以处理人全血、小鼠全血、脾细胞中的红细胞。
2.高效，一次处理能裂解80%以上的哺乳动物红细胞，能回收90%左右的白细胞。一般样品最多只需要处理两次。
3.扩容性好，可以一次处理多达几十毫升的样品，也可以处理100μL的血液。
4.基于NH4Cl 裂解法，得到的白细胞主要用于流式细胞分析。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
用去离子水将本产品(10×)稀释为1×工作液(1mL 本产品加9mL去离子水)，待温度回到室温或37℃加热到37℃的时候再使用。工作液不能长期放置，只能现配现用。

一．裂解哺乳动物全血中的红细胞
1.离心哺乳动物抗凝血液后弃血浆部分，按每1mL 哺乳动物抗凝血液细胞沉淀加10mL 1×工作液的比例加入红细胞裂解液B型的1×工作液。
2. 轻柔吹打充分混匀。
3.室温放置 15分钟(注意：放置时间不要超过15分钟)。
4. 4℃1000rpm离心10分钟，吸弃红色的上清液。
5. 如果红细胞裂解不完全，可以重复第 1-4 步。
6. 用适当的自备缓冲液(如Hanks溶液)重悬白细胞沉淀。
7. 用于细胞计数和流式细胞分析等后续试验。

二．裂解组织细胞中的红细胞
1. 按标准方法用自备的胰酶将组织消化成单个细胞悬液，离心弃上清。
2. 按 1：10的比例向细胞沉淀中加入红细胞裂解液B型工作液，轻柔吹打均匀。
3.室温放置 15分钟(注意：放置时间不要超过15分钟)。
4. 4℃ 1000rpm离心10分钟，吸弃红色的上清液。
5. 如果红细胞裂解不完全，可以重复第 2-4 步。
6. 用适当的自备缓冲液(如 Hanks溶液)重悬白细胞沉淀。
7. 用于细胞计数和流式细胞分析等后续试验。


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·酿酒酵母Y187感受态细胞
编号：BTN140389
英文名称：E.coli Y187 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通过mating 操作进行筛库试验。Transformation marker 为: trp1，leu2，报告基因为：lacZ，MEL1。Y187-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1～ 174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768～881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端1～174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C端768～881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果 bait和prey发生相互作用，就会促使 BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y187 有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种不同的启动子(G1，M1)启动，这两种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y187感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，本产品经特殊工艺制作而成，经PGADT7质粒检测转化效率为104 cfu/μg DNA。

菌株基因型：MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–,gal80Δ，URA3: :GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1

产品组成：

成分	规格
Y187感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7(control vector)，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/liAC、PGADT7质粒4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入预冷的目的质粒2-5μg，CarrierDNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)10μL，PEG/LiAc 500μL，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μL ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取 50μL ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

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