通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒厂家直销

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百奥莱博专业生产供应通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒厂家直销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒
编号：BTN101114
规格：50次
英文名：Universal Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification Kit
品牌：百奥莱博
本试剂盒可以用于RT-LAMP等温扩增，RT-LAMP即逆转录和Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增)的结合，专门用于快速扩增RNA。LAMP是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4或6条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶，在等温条件下(63℃左右)30－60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于RT-PCR技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。

产品特点：
1.高特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比RT-PCR更高。
2.高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的RNA分子
3. 65℃左右完成RT和LAMP扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板RNA外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

试剂盒组成：

 

成分	规格
RT-LAMP Mix(2×)	0.5ml
AMV-Bst混合液	75μl
对照引物混合物	40μl
对照模板	5μl
MgCl2(25mM)	0.2ml
RNase-free水	1ml
说明书	1份

注：RT-LAMP Mix(2×)稀释到1×时，已经有8mM Mg2+，本试剂盒提供的MgCl2(25mM)用于用户优化条件用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
RT-LAMP Mix(2×)	10μl	10μl
自备FIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备BIP引物终浓度	0.8μM	0.8μM
自备F3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备B3引物终浓度	0.2μM	0.2μM
自备Loop F引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备Loop B引物终浓度(可选项)	0.4μM	0.4μM
自备模板 RNA	1-100ng	不加
AMV-Bst 混合液	1.5μl	1.5μl
补水到	20μl	20μl

 注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL)，则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则最好保温120分钟；如果使用Loop引物，则最好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。此酶有外切酶活性，所以必须灭活。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；
c)荧光定量检测。
5. 结果分析：
a)如果没有扩增，则需要用本试剂提供的阳性对照进行扩增。本试剂盒提供阳性对照，反应按下表设置：

成份	阳性对照管
RT-LAMP Mix(2×)	10μl
对照引物混合物	4.0μl
对照模板	1μl
AMV-Bst 混合液	1.5μl
水	3.5μl

 混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以最好保温120分钟。
b)如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家联系。

注意事项：
1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外，尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成10.浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。
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编号	名称
BTN3120	微量RNA助沉剂
BTN80814	Bradford法蛋白定量试剂盒
BTN131294	ECD-G固定液
BTN101208	1M Tris-HCl(pH9.0)(DNA级)
BTN160680	无缝克隆试剂盒
BTN130923	LAMP扩增阳性对照
BTN60302	硫*(代"酸")卡那霉素干粉
BTN80802A	非冻型拭子DNA保存液
BTN120708	凝血酶
BTN160227	甲醛-乙酸-乙醇固定液(FAA)
BTN131081	重组蛋白A/G
BTN121004	大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞
BTN131085	亲和素
BTN71201	动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
BTN100307D	酸洗玻璃珠(800μm)
BTN140385	农杆菌LBA4404化学感受态细胞
BTN160101	pUCm-T载体
BTN131293	对*醌固定液
BTN120503	藻类RNA柱式提取试剂盒
BTN100214	预混型BCIP/NBT溶液
BTN140234	SYBR Green Ⅱ核酸染料(10000×)
BTN130430	大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ
BTN131198	一步法96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法)
BTN160655	Levaditi硝酸*(代"银")法螺旋体染色试剂盒
BTN71202	血液RNA柱式提取试剂盒
BTN140384	农杆菌GV3101化学感受态细胞
BTN131281	乙醇-甲醛固定液
BTN151203	生物素标记UTP溶液(Biotin-16-UTP )
BTN140649	1mL亲和层析柱
BTN130986	即用型热启动PCR试剂盒
BTN140374	大肠杆菌DH10B化学感受态细胞
BTN130535	APMSF溶液(10mg/mL)
BTN81107	无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒
BTN130969	冷冻型血液RNA保存液
BTN100808	*化乙锭干粉(EB干粉)
BTN100840	嘌呤霉素干粉
BTN130594	HRP标记内参抗体(β-Tubulin)
BTN100937	phi29 DNA聚合酶
BTN100832	四氮唑蓝(NBT)