一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)库存

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)库存，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)库存
产地：国产|进口
英文名：One-Stop Biotin-Based TUNEL Kit
品牌：百奥莱博
规格：10次
TUNEL就是末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口及末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)，它是一种高灵、敏度、快速检测细胞凋亡的方法。其原理是在发生凋亡细胞中会有大量的具有切口的DNA片段、或具有游离3´-OH端、长度是180-200bp倍数的DNA片段，TdT(末端脱氧核苷酸转移酶)可以以不依赖模板的方式进行标记，如参入荧光素、生物素或地高*(代"辛")等标记的dUTP，而正常细胞DNA几乎没有游离的3´-OH和切口，所以通过对标记物的显色反应和荧光显微镜或流式细胞仪检测就可以区分正常和凋亡的细胞。

试剂盒特点：
1．一站式，不需要额外准备专用的试剂(但客户还是需要自备常规的试剂，如水、PBS和细胞涂片所需试剂)。
2．高灵敏度，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，适合检测早期的细胞凋亡。
3．特异性高，只标记凋亡细胞，而不标记坏死细胞。
4．快速，整个操作过程仅需1-2个小时即可完成。
5．方便，一步染色反应，洗涤后即可观察，不必使用二抗等进行多步操作。
6．适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)，本试剂盒足够处理十张切片使用。

试剂盒组成：

 

成分	规格
1×TdT Buffer	0.5ml
TdT酶(20U/μL)	10μl
蛋白酶K溶液(200μg/mL)	1ml
Streptavidin-HRP	50μl
DAB干粉	1mg
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、样本预处理(操作步骤仅供参考，本试剂盒不提供相关试剂)
下面所用的固定液、淬灭液和通透液均需要新鲜配制。固定液是溶于pH7.4的PBS中的、浓度为4%的多聚甲醛溶液；淬灭液是用甲醇将H2O2原液(30%)稀释到3%而得；通透液是溶于0.1%柠檬酸*中的、浓度为0.1%的Triton X-100溶液。

对贴壁细胞或细胞涂片
1．将自然晾干的贴壁细胞或细胞涂片浸入固定液中室温固定30-60分钟。为改善细胞的渗透性，可将固定好的样本放在70%乙醇中-20℃放置过夜。为防止样本脱落，可使用硅烷处理的载玻片或采用多聚赖*酸铺片。
2．用自备的PBS漂洗2次，每次5分钟。
3．浸入淬灭液中室温放置10分钟后，用PBS漂洗2次，每次5分钟。
4．浸入通透液中，冰上放置2分钟后，用PBS漂洗 2次，每次5分钟。用吸水纸吸干样本周围水分，待用。
对石蜡组织切片
1．将切片置于染缸中，用二甲*脱蜡2次，每次5分钟；再分别用100%、95%、90%、80%、70%的乙醇和PBS各洗一次，每次3分钟。
2．在每张切片上滴加100μl蛋白酶K工作液(10μl蛋白酶K溶液+90μlPBS缓冲液)并在室温放置15-30分钟以降解交联的蛋白和其他内源蛋白。注意：蛋白酶K工作液的用量和处理时间一般都需根据样品的不同而单独进行优化，此处的用量只供参考。蛋白酶K处理后不需要再淬灭内源蛋白酶。
3．用PBS漂洗4次，每次3分钟。此步不能省略，否则残留的蛋白酶K将会降解后面降压加入的TdT。用吸水纸吸干样本周围水分，待用。
对冰冻切片
1．将切片在固定液中室温固定20-60分钟，PBS洗涤2次，每次10分钟。
2．浸入淬灭液中室温放置10分钟后，用PBS漂洗两次，每次5分钟。
3．浸入通透液中冰上放置2分钟后，用PBS漂洗两次，每次5分钟。用吸水纸吸干样本周围水分，待用。
阳性对照样本
所有处理步骤跟样品一样，只是在最后还需在样品上滴加100μL自备的DNase I反应液室温放置10-30分钟。反应液含40mM Tris-HCl pH7.9，10mM NaCl，6mM MgCl2，10mM CaCl2和不同浓度的DNaseI(冷冻切片需3U/mL、石蜡切片需1500 U/mL、一般样本需10U/mL)。用PBS洗两次，每次5分钟。用吸水纸吸干周围水分后待用。

二、标记和显色反应
1．配制所需量的TdT酶反应液：将1μl TdT酶加入到 50μl 1×TdTBuffer中即可。TdT酶反应液需即用即配，不宜保存，否则酶会失活。
2．在除阴性对照外的每个样本上滴加50μl TdT酶反应液，加盖玻片后37℃避光放置60分钟。注意：加盖玻片可使反应液均匀分布，并避免其挥发。阴性对照只滴加50μl不含TdT酶的反应液。
3．用自备的PBS清洗3次，每次 5分钟，用吸水纸吸干样本周围残留液体。
4．将5μl Streptavidin-HRP溶液加入45μl PBS中，混匀后全部加在切片上并加盖玻片，37℃避光放置30分钟。
5．用自备的PBS清洗4次，每次5分钟，用吸水纸吸干样本周围残留液体。
6．滴加50μl 新鲜配制的DAB工作液(将1mg DAB干粉溶于1mL PBS中，取50μL与1μl 30% H2O2混合即得DAB工作液，剩余的DAB溶液可-20℃避光保存)，室温显色10分钟。
7．PBS漂洗4次，前3次每次1分钟，最后1次5分钟。
8．光学显微镜下观察、拍照。亦可用苏木素或甲基绿复染复染后再观察。

除一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)库存外，我公司正在打折促销以下产品：
HC0153 多用冰盒
ARB12115 大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)elisa检测 Rat soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1,specam-1 ELISA KIT
DP349 血液基因组DNA提取系统(0.1-20 ml)
E0501 抗凝驴血(无菌 pet瓶装)
ARB12347 大鼠尿素(UreA)尿液中含量检测 Rat urea ELISA KIT
基底膜六胺银染色液   6×50ml
ARB10033 人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA代测服务 Human hydroxylysine,hyl ELISA KIT
ARB10493 人白介素6(IL-6)含量测试 Human interleukin 6,IL-6 ELISA KIT
J0315                  山羊抗人IgG(H+L)抗血清                          
ARB12268 大鼠多巴胺D2受体(D2R)ELISA代测服务 Rat dopamine d2 receptor,d2r ELISA KIT
606-68-8 NADH Na2  　还原型辅酶Ⅰ二*
癸基吡喃葡萄糖苷 L-Alanine 58846-77-8
ARB11528 人脑肠肽(BGP/GehrelIn)血清中含量检测 Human brain-gut Peptides,bgp/gehrelin ELISA KIT
BL1313 2×Taq Plus PCR MasterMix(不含染料)
苏丹Ⅳ染色液   3×50ml
矿物油 Potassium citrate monohydrate 8042-47-5
一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)库存关键词：一站式生物素检测TUNEL试剂盒,DAB法,One-Stop Biotin-Based TUNEL Kit,BTN81026,一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)


·软骨RNA提取试剂盒
编号：BTN70401
英文名称：Cartilage RNA Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒专门从各种软骨组织样品中快速提取总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。

试剂盒特点：
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA产率一般为5-15μg/100mg。
3. 操作简单，整个提取过程一般只需要10多分钟。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将50-200mg新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入1mL溶液A(使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解)溶解，然后将研磨物转移到新的1.5mL离心管中，振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液A一起匀浆，再转移到离心管中。
2.在装有研磨物/匀浆物的离心管中加入0.3mL的溶液B，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3. 加入0.2mL自备*仿，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000～15000g离心2-5分钟。
5. 将上清液(约0.8mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μl上清液不取。
6.在上清液中加入0.5mL的溶液C，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7. 加入0.2mL的自备*仿，振荡器振荡30秒混匀。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
8.室温12000～15000g离心3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
9. 将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
10.在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，振荡器振荡30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。注意：振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
11.室温12000～15000g离心5-10分钟，RNA将在管底形成白色沉淀(约黄豆大小)。如果组织样品量少或需要提高RNA回收率，也可以延长离心时间到20-30分钟。
12.在离心管中加入1mL 75%的乙醇，振荡器上振荡混匀30秒。
13.室温12000～15000g离心5分钟，RNA将在管底形成细小沉淀(约芝麻大小)。
14. 重复上步75%的乙醇洗涤一次，RNA将在管底形成细小沉淀。
15.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
16. 再短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液。注意：不要吸弃沉淀。此步将有效去除残留的乙醇，否则后续反应会受到影响。
17. 加入适量(一般为20-50μl)RNase-free水使RNA沉淀溶解，存放于-80℃或立即使用。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。
18. 检测

a)RNA完整性的电泳检测
如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上样液不含变性剂，也没经过去RNase处理，所以最好不要使用。
尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
由于动物细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由28S(约4800nt)，18S(约1900nt)和5.8S(约120nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以28S rRNA条带的荧光强度一般比18S rRNA条带的荧光强度强1.5-2.3倍。如果这两条rRNA带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解(因为大的RNA被酶降解的可能更大)。

b)RNA产量产率测定
将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。

c)RNA纯度测定
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNA Scavenger和PS Scavenger去除。



一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)库存关键词：一站式生物素检测TUNEL试剂盒,DAB法,One-Stop Biotin-Based TUNEL Kit,BTN81026,一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)


·一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
编号：BTN90317
英文名称：One-Stop DNA Urea-PAGE Pack
规格：30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。

产品特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。

产品组成：

成分	规格	保存
电泳级尿素	210g	常温
电泳级丙*(代"烯")酰胺	77.34g	常温
电泳级甲叉双丙*(代"烯")酰胺	2.67g	常温
10×TBE电泳液	250ml	常温
电泳级TEMED	1.5ml	4℃，避光
电泳级过硫*(代"酸")铵	1g	常温
2×尿素-PAGE上样液	1ml	-20℃
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29：1(丙*(代"烯")酰胺：甲叉双丙*(代"烯")酰胺)的交联度，
在此条件下，DNA片段和最适PAGE浓度对应关系如下：

单链DNA长度	最佳PAGE浓度	二甲*青FF迁移率 对应的长度	*酚蓝的迁移率 对应的长度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1 克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜交联度为29:1的40%的丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(AB溶液，下同)：在装有77.34 g电泳级丙*(代"烯")酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双丙*(代"烯")酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙*(代"烯")酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C：配尿素-PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。丙*(代"烯")酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(尿素为克，其余单位是mL)			补水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。最好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。

三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1 混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品：可以直接上样。

四：电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率，大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。

我公司生产供应销*(代"售")的细胞及免疫学产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购一站式生物素检测TUNEL试剂盒(DAB法)库存。