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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输
- 保质期:
一年
- 英文名:
Fungal RNA Column large-scale extraction kit
- 库存:
892
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京柱式真菌RNA大量提取试剂盒优惠促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京柱式真菌RNA大量提取试剂盒优惠促销
规格:5次
编号:BTN80904
英文名:Fungal RNA Column large-scale extraction kit
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒是在本公司柱式真菌RNA提取试剂盒(BTN80804)的大提升级产品,跟柱式真菌RNA提取试剂盒相比,它具有下列特点:
1.样品处理量大,最多可以处理50mL液体培养物或2g菌丝体。
2. 操作简单快捷,整个过程只需要约30分钟。
3. RNA 纯度高,OD260/280一般都在2.0左右,可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA产量高,一般在20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
5. 非酶细胞破裂法,适用于各种形态的真菌和各个种属的真菌,包括Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris等。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 溶液C | 100ml |
| 溶液D | 30ml |
| 大提离心吸附柱 | 5套 |
| 通用洗柱液 | 100ml |
| RNA洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 将50mL液体真菌培养物在塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心1分钟,并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。如果是菌丝体,则直接称取2 克放入50mL塑料离心管中。
2. 加入10mL溶液A并充分吹打混匀。注意:溶液A存放时容易产生沉淀,如果有沉淀,用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10mL溶液B,剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3~5分钟,转移上清到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入2mL自备的*仿,充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3~5分钟,转移上清液到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(体积越10mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D,充分混匀。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中,每次转移后需要室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合,然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒,弃收集管中的穿透液,然后再加入后一批混合液,重复操作,直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤:将10mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤:一次洗涤一般足够去除杂质,但如果样品OD260/280 比值不高,可以再用10mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50mL塑料离心管中,加入1mL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测:
注意:普通DNA上样液不含变性剂,更没经过去RNase处理,所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定:
将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280,否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%;也不要稀释过度,使OD读数在仪器的有效范围之外,这样得到的OD 比值没有意义。
疑难解答:
Q:上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗?
A:不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象,百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物,加RNase处理后,这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象,建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶,也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时,可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2,最好不要使用TBE缓冲液,因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物,RNA 很难形成锐利的条带。
Q:如何确认和去处除污染的基因组DNA?
A:如果怀疑有DNA污染,可以用RNase处理RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用5分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
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北京柱式真菌RNA大量提取试剂盒优惠促销关键词:BTN80904,Fungal RNA Column large-scale extraction kit,柱式真菌RNA大量提取试剂盒
·两性霉素B
编号:BTN120681
英文名称:Amphotericin B Solution
规格:1mL
本品为浓度为20mg/mL两性霉素B的水溶液。两性霉素B(二性霉素B;节丝霉素B;Fungizone)分子式:C47H73NO17,分子量:924.08,CAS号:1397-89-3,可溶性两性霉素B系来自链霉菌的多烯抗真菌类抗生素,它与真菌细胞膜的固醇类物质,特别是麦角固醇有亲和性,在膜上形成通道,使一些小分子流失。抗菌谱为真菌和酵母,多用于细胞培养。在日光下易被破坏失效。
储存条件:低温运输、-20℃避光保存,有效期6个月。
·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH8.5)(RNase-free)
编号:BTN80918
英文名称:RNase-free Tris·HCl Solution(1M,pH8.5)
规格:250mL
本品为浓度为20mg/mL两性霉素B的水溶液。两性霉素B(二性霉素B;节丝霉素B;Fungizone)分子式:C47H73NO17,分子量:924.08,CAS号:1397-89-3,可溶性两性霉素B系来自链霉菌的多烯抗真菌类抗生素,它与真菌细胞膜的固醇类物质,特别是麦角固醇有亲和性,在膜上形成通道,使一些小分子流失。抗菌谱为真菌和酵母,多用于细胞培养。在日光下易被破坏失效。
储存条件:低温运输、-20℃避光保存,有效期6个月。
·血清血浆游离RNA提取试剂盒
编号:BTN130978
英文名称:Serum/Plasma RNA column Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒是专门用于从血清/血浆等液体样品中提取游离RNA的产品。
试剂盒特点:
1. 操作简单,整个过程只需要20分钟左右,不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2. 灵敏度高,通过RT-PCR检测到的最终灵敏度可以达到50拷贝/mL。
3. 安全无毒,不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
4.与RT-PCR和荧光RT-PCR兼容。
5. 价廉物美,性价比远低于国外同类产品。
6.适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
试剂盒组成:
| 成份 | 编号 | 规格 |
| 溶液A | BTN130978A | 30mL |
| 离心吸附柱(小提) | BTN60911 | 50套 |
| 通用洗柱液 | BTN60408 | 50mL |
| RNA洗脱液 | BTN71207 | 10mL |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL血清/血浆样品。如果样品需要富集,可以将1.5mL液体在4℃下24,000 g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL后继续操作。
2. 加入0.6mL溶液A,振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意:溶液A在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将溶液全部转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟。
4. 12000~15000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。
5. 加入0.8mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。
6. 12000~15000g室温离心半分钟。
7.在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μL通用洗脱液,然后将离心吸附柱套入一新的1.5mL离心管中,室温放置2分钟。
8. 12000~15000g室温离心1分钟,离心管中收集的样品即为RNA。
9. RNA样品可以直接用于RT-PCR或逆转录反应,也可放-80℃长期保存。注:游离的RNA一般含量极少,不宜用电泳法检测。
疑难解答
Q:提取血清血浆等液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子,每种RNA有很多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少,所以操作中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸绝对量很少,不能使用电泳和测OD检测,只能通过PCR或RT-PCR检测,而PCR或RT-PCR的条件又需要优化,所以要确定提取是否成功十分不容易。
北京柱式真菌RNA大量提取试剂盒优惠促销关键词:BTN80904,Fungal RNA Column large-scale extraction kit,柱式真菌RNA大量提取试剂盒
·dNTP和引物清除剂
编号:BTN131141
英文名称:dNTP-Primer Scavenger
规格:100次
本产品是基于酶学方法的一步法清除dNTP和引物的试剂,用于在PCR结束后去除残留的dNTP和引物,使PCR产物可以不经过任何形式的回收而直接用于后续的测序等反应。
储存条件:低温运输和-20℃保存、有效期一年。
·蓝色DNA上样液,6×
编号:BTN3690B
英文名称:DNA Loading Buffer(Blue)
规格:10mL
DNAload可以作DNA上样液用,含甘油和红色染料(BTN3690A)或蓝色染料(BTN3690B),便于直接上样和观察电泳进程。含红色染料的3690A还可以直接加到PCR反应体系中,不会干扰PCR反应,PCR结束后可以直接电泳,其红色染料泳动速度与50bp DNA片段相当,对绝大多数PCR片段的观察不会造成干扰,尤其适用于长度在2 Kb以下的DNA片段的电泳。含蓝色染料的BTN3690B其染料为*酚兰和二甲*蓝,适合于基因组合DNA和其他大片段DNA的电泳。本产品与TAE、TBE和百奥莱博的超快电泳缓冲液SuperBuffer-2 兼容。
试剂盒组成:
| 成分 | 10mL(A) | 10mL(B) |
| RNAep | 10ml(红色) | 10ml(蓝色) |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃(短期)或-20℃(长期)保存有效期一年。
使用方法:
DNA电泳(对BTN3690A和BTN3690B)
DNAload 为6×浓缩液,按5:1的比例将DNA样品与本产品混合(如10μl DNA样品+2μl 本产品),直接上琼脂糖凝胶电泳(以TAE或TBE 为电泳缓冲液),根据胶的大小选择合适的电压进行电泳,电泳完毕后可直接将凝胶放在紫外灯下观察结果。
加入PCR中使用(仅对BTN3690A)
DNAload 为6×浓缩液,如果加入到PCR 体系中,需要使其终浓度为1×,具体用量需要根据PCR 体积决定,PCR结束后直接上样电泳。注意:不能将3690B 加到PCR 体系中,因为其染料抑制Taq DNA聚合酶活性。
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