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- 北京
- BTN150801-WXI
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
干冰运输、-80℃保存
- 保质期：
长期
- 英文名：
E.coli BL21 Star(DE3) Chemical Competent Cell
- 库存：
573
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞厂家
规格：10*100μL
产地：国产|进口
编号：BTN150801
英文名：E.coli BL21 Star(DE3) Chemical Competent Cell
BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，由特殊工艺制作，使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达10⁷cfu/μg。
BL21 Star(DE3)菌株的特点是含有rne131基因突变体。rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而有效提高蛋白表达能力。本产品主要适用于T7启动子表达载体(如pET 系列)的高水平蛋白表达。
菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)。
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、LB培养基等。
使用方法：
1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 取 100μL冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
3. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
4. 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
5. 取100μL左右菌液涂布于含相应抗生素的LB培养基上。如果转化高浓度的质粒，可以减少涂布的量。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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·BAL 31核酸酶
编号：BTN120409
英文名称：BAL 31 Nuclease
规格：50U
BAL 31核酸酶纯化自埃氏交替单胞菌BAL-31培养物。BAL-31核酸外切酶降解双链DNA的3´和5´末端，不切割分子内部。该酶同时还是高度特异性的单链核酸内切酶，在切刻、缺口、双链DNA单链区和双链RNA的单链区进行切割。其工作原理图如下：
产品特点：
1．从两端逐步对双链DNA进行切割，缺失的长度适合于100～1000个碱基左右。
2．加入EGTA可失活。
3．限制性酶切图谱的构建。
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
活性定义：1单位指在50μl反应体系，1X核酸酶BAL-31反应缓冲液，30℃条件下，10分钟从线性双链φX174 DNA(40μg/ml)的两端各切下200个碱基对所需要的酶量。
使用方法：
1．在离心管中加入下列溶液：
| 成分 | 用量 |
| pBR322 -Ava I fragment | 3μg(2.0pmol) |
| 2×反应 Buffer | 37.5μl |
| BAL 31 Nuclease | 3～6U |
| H2O | up to 75μl |
2．30℃保温。分别于1、2、3 min时各取样25μl。
3．加入20mM EGTA，65℃加热10分钟灭活酶。
4．用1% Agarose电泳确认DNA片段。
注意事项：
1．该核酸外切酶的双链产物是平齐末端和粘性末端的混合物。尽管要达到最佳连接效率需要用合适的聚合酶修复粘性末端，但该混合物仍可以直接进行克隆。
2．如果需要，可以在使用前用反应缓冲液稀释该酶。
3．只有在20mM EGTA存在条件下，酶的热失活才有效。
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文献和实验(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3
(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3
实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
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