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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输及保存
- 保质期:
一年
- 英文名:
One-step DNA extraction kit
- 库存:
263
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")一步式复杂样品DNA提取试剂盒厂家价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:一步式复杂样品DNA提取试剂盒厂家价格
规格:10mL
英文名:One-step DNA extraction kit
品牌:百奥莱博
编号:BTN61202
本试剂盒是专用于从各种常见的样品中快速提取用于PCR扩增的DNA。
试剂盒特点:
1.操作简单,只用一步(约5-10分钟)即可以得到用于PCR扩增的DNA 模板,不需要任何离心、抽提等操作步骤,比常用的Chelex100提取方法和*酚/*仿方法快。
2.兼容性广,可以用于几乎所有的分子生物学样品,包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3.环保健康,不使用任何有毒有害的试剂。
4.尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 一步式广谱DNA提取试剂 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1. 将约2μl液体样品(如全血、细胞培养液)或2mg的固体样品(如动物组织,约半粒芝麻大小)加入到50μl 本产品中。
注意:样品加入量可能需要根据其DNA的含量稍做调节,如果样品DNA含量少,则用量要增加,但总液体样品用量最好不要超过本产品用量的1/10;固体样品用量最好不要超过1mg/10μl的比例。下面是部分常见生物样品的DNA含量:
| 材料 | DNA含量 |
| 精液 | 150-300μg/mL |
| 血液 | 20-40μg/mL |
| 精斑 | 20-30μg/cm2 |
| 唾液 | 1-10μg/mL |
| 血斑 | 250-500 ng/cm2 |
| 口腔拭子 | 100-1500 ng/拭子 |
| 组织 | 50-500 ng/mg |
| 阴道拭子 | 10-3000 ng/拭子 |
| 骨头 | 3-10 ng/mg |
| 拔出的带发根头发 | 1-750 ng/发根 |
| 尿液 | 1-20 ng/mL |
| 自然脱落的带发根头发 | 1-10 ng/发根 |
2. 80℃加热5分钟后。
注意:此步的条件可以根据样品的质地稍做调节。如果是液体样品,室温处理1-3分钟即可。如果是难以破裂的细胞和材料(如酵母、石蜡组织切片、血斑),则保温时间可以延长到10-30分钟。
3. 简短振荡混匀后取裂解物直接进行PCR(裂解物体积最好不要超过PCR 体积的1/10)。
4.其余同常规操作。
疑难解答:
Q: 本产品与美国BioVenture的GeneReleaser 有何区别?
A: 本产品处理简单,只需要80℃加热5分钟即可;而GeneReleaser 加热处理复杂而繁琐,共需要9 步处理,累计时间需要10 余分钟量(具体是65℃ 30s,8℃ 30s,65℃ 90s,97℃ 180s,8℃ 60s,65℃ 180s,97℃ 60s,65℃ 60s,80℃放置),手工操作时十分难以控制。
Q: 用本产品提取的DNA 能否用电泳方法检测?
A: 由于DNA含量太少,不能用电泳方法检测。
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·蛋白酶K溶液
编号:BTN80911
英文名称:Proteinase K Solution
规格:5mL
本产品是浓度为10mg/mL的蛋白酶K溶液,可以直接加入到各种溶液中降解其中的蛋白质。可以用于核酸纯化、原位杂交、DNA脉冲电泳和蛋白指纹图谱分析等实验。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·一站式MBP标签蛋白纯化套装
编号:BTN130871
英文名称:One-Stop MBP-Tagged Protein Miniprep Pack
规格:2mL
MBP(麦芽糖结合蛋白,Maltose Binding Protein)标签蛋白大小为40 kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。MBP融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化,结合的融合蛋白可用10mM麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。由于MBP融合蛋白原核表达载体具有表达效率高,易于纯化等优点。在现代分子克隆中MBP常作为融合蛋白被广泛应用。本产品就是专门用于分离纯化MBP融合蛋白的试剂盒,其原理如下:
产品特点:
1.一站式套装,含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱,操作非常方便。
2.提供 2mL直链淀粉-琼脂糖介质,其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质。
3.采用麦芽糖温和洗脱,无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4.本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 直链淀粉-琼脂糖介质 | 2ml |
| 1 M Tris-HCl(pH7.4) | 25ml |
| 0.1 M EDTA溶液 | 25ml |
| 2 M NaCl溶液 | 50ml |
| 蔗糖 | 20g |
| PMSF(10mg/mL) | 1ml |
| 0.1mM MgCl2溶液 | 50ml |
| 0.1 M麦芽糖溶液 | 25ml |
| 层析柱(6mL) | 1支 |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,但介质需4℃保存,PMSF需要-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后,取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据MBP蛋白产量决定,其最大载量为10mg MBP蛋白/mL介质,请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中)。
2.用5倍柱体积(柱体积指的是填料介质的体积,下同)自备去离子水洗柱,共3次。
3.用5倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱,进行平衡,使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。结合缓冲液的配方如下(以10mL为例):
| 成分 | 用量 | 在结合缓冲液中的浓度 |
| 1M Tris-HCl(pH7.4) | 0.2mL | 20mM |
| 0.1M EDTA溶液 | 0.1mL | 1mM |
| 2M NaCl溶液 | 1mL | 200mM |
| 自备去离子水 | 8.7mL | - |
4.4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液,弃上清,将细胞沉淀(约100mg)悬于2mL冰冷的现配的细胞洗涤液中,4℃ 5000g离心15分钟收集细胞沉淀后,再次悬于2mL冰冷的细胞洗涤液中。(最好用不加诱导物的菌液做对照样。)细胞洗涤液的配方如下(以10mL为例):
| 成分 | 用量 | 在细胞洗涤液中的浓度 |
| 1M Tris-HCl(pH7.4) | 0.1mL | 10mM |
| 2M NaCl溶液 | 0.15mL | 30mM |
| 自备去离子水 | 9.75mL | - |
5.制备细胞裂解物:
1)如果所用载体不带MBP信号肽序列(如pMAL-c2)
a)超声破碎细胞,功率30 W,保持细胞低温(0℃),直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。(超声参数需根据仪器型号自行摸索,但裂解物必须不粘稠,否则会堵塞层析柱。)
b)为使溶液澄清,向上述细胞洗涤液中加入35μl PMSF(10mg/mL)。
c)4℃下13000-15000g离心30分钟,以去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱,收集上清样品,留样做 SDS-PAGE电泳对照,其余样品用于纯化MBP融合蛋白,直接进入第6步。
2)如果所用载体带MBP信号肽序列(如pMAL-p2)
a)4℃ 5000g离心15分钟收集细胞,沉淀悬于1mL冰冷的现配的细胞裂解液中。细胞裂解液的配方如下(以10mL为例):
| 成分 | 用量 | 在细胞裂解液中的浓度 |
| 1M Tris-HCl(pH7.4) | 0.3mL | 30mM |
| 0.1M EDTA溶液 | 0.01mL | 0.1mM |
| 蔗糖 | 2g | 20%(m/V) |
| 自备去离子水 | 加水到10mL | - |
b)加入25μl PMSF(10mg/mL),室温搅动15分钟,于4℃ 13000-15000g离心10分钟收集细胞。
c)旋动细胞沉淀,加入2mL冰冷的0.1mM MgCl2溶液,4℃搅动10分钟。
d)休克细胞4℃ 13000-15000g离心10分钟,在上清中加入10mM Tris-HCl(pH7.4)(可将1 M Tris-HCl,pH7.4稀释100倍配制而成)至pH为7.4。
e)上清用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,滤液用100倍体积的10mM Tris-HCl(pH7.4)(配方如上)4℃透析。
f)收集透析后样品,留样做 SDS-PAGE电泳对照,其余样品用于纯化MBP融合蛋白,直接进入第6步。
6.将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中(保证目的蛋白与介质充分接触,以提高目的蛋白的回收率),收集流出液。
7.用10-15倍柱体积的结合缓冲液(配方见上表)进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
8.使用5-10倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白,收集洗脱液(即目的蛋白组分)。麦芽糖洗脱液的配方如下(以10mL为例):
| 成分 | 用量 | 在麦芽糖洗脱液中的浓度 |
| 1M Tris-HCl(pH7.4) | 0.2mL | 20mM |
| 0.1M EDTA溶液 | 0.1mL | 1mM |
| 0.1M麦芽糖溶液 | 1mL | 10mM |
| 自备去离子水 | 8.7mL | - |
9.将纯化得到的样品(包括流出液、洗杂液和洗脱液)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
10.填料介质清洗:依次使用3倍柱体积的结合缓冲液和5倍柱体积的去离子水平衡介质,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。本介质可重复使用。
蛋白酶切割释放靶蛋白(可选步骤,所用试剂需自备)
11.用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1)加入自备的凝血酶、肠激酶或Xa因子(根据融合蛋白中的位点选择)。每毫升介质中加入50单位的溶于1mL PBS溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀,室温下振荡2-16小时。
2)4℃以500 g离心5分钟,上清小心转移到新离心管中。
3)用传统的层析方法或SDS-PAGE电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
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·中等RIPA裂解液
编号:BTN131007
英文名称:RIPA Lysis Buffer(Medium)
规格:250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强,对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果,本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂,能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表:
| 产品名称 | RIPA裂解液(强) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) |
| 有效裂解成分 | 1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.5% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.25% deoxycholate |
| 裂解强度 | 强 | 中 | 温和 |
| 对膜蛋白的提取 | 很好 | 较好 | 一般 |
| 对胞浆蛋白的提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 对核蛋白的提取 | 很好 | 较好 | 较好 |
| 胞浆磷酸化蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 细胞核转录因子提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 含蛋白酶抑制剂 | 是 | 是 | 是 |
| 含磷酸酯酶抑制剂 | 是 | 是 | 是 |
| 主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,co-IP |
储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
对于培养细胞样品:
1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
备注:
1.为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒,不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
一步式复杂样品DNA提取试剂盒厂家价格关键词:BTN61202,One-step DNA extraction kit,一步式复杂样品DNA提取试剂盒
·Real-Time PCR稀释液
编号:BTN130816
英文名称:Diluent for Real-Time PCR
规格:1mL
本制品是制作标准曲线时用于梯度稀释DNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或模板RNA如果用水或TE稀释时,由于受Microtube的吸附作用等原因的影响,往往不能准确地进行稀释,导致实验结果精度降低。使用本制品稀释DNA或RNA样品时,即使稀释至低浓度也能够准确稀释,容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。
储存条件:低温运输和-20℃保存,有效期一年。
注意事项:为避免样品间的交叉污染,最好适量分装或小份后保存。
·烷基腺嘌呤DNA糖基化酶(AAG)
编号:BTN130643
英文名称:Alkyladenine DNA Glycosylase
规格:500U
人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶(hAAG)作用于烷基化和氧化了的DNA 损伤位点,包括3-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、1,N6-乙*(代"烯")基腺嘌呤和次黄嘌呤。hAAG催化 N-糖苷键的水解断裂,释放受损碱基。其反应示意图如下:
产品特点:
1.单细胞凝胶电泳(彗星试验);
2.碱洗脱;
3.碱解旋。
产品组成:
| 组份 | 规格 |
| hAAG(10000U/mL) | 50μL |
| 10×Buffer | 1mL |
| 使用手册 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位是指在10μl反应体系中,37℃条件下,1小时从1pmol含有单一脱氧次黄嘌呤核苷位点的34bp寡核苷酸双链产生一个AP位点所需的酶量。
热失活:65℃,20分钟。
我公司生产供应销*(代"售")的DNA纯化正全品类优惠促销,十分期待您的咨询选购一步式复杂样品DNA提取试剂盒厂家价格。
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文献和实验,并选择离子交换层析进行第一步捕获。如果样品初始处在高盐缓冲液(硫酸铵沉淀),就可以调整样品的初始电导率,选择疏水层析进行初步捕获。 2、根据离子交换和疏水层析的洗脱特点,样品洗脱的缓冲液不同,进行合理衔接中度纯化。通常将离子交换和疏水层析交叉使用,不仅可以让样品在不同维度进行纯化,还可以节省衔接实验的处理过程。 3、复杂难纯的天然蛋白,可以再加一步精细纯化。凝胶过滤分子筛是较优选择,原因其一是当带电性和疏水性两个维度都无法分离的杂质,还可以用分子量这个维度来处理。其二是凝胶过滤层析对样品的缓冲液条件
1、引言通过对生物芯片点样仪市场的调研,特别是经过对美国的Genemachine公司、Cartesain公司以及英国的Biorobotics公司等几个品牌生物芯片点样仪厂家产品的现场考察,在汲取了它们的优点的基础上,形成了我们将要自主研发的DY-2001型生物芯片点样仪的机械结构的构想。2、载片台的确定由于研发DY-2001型生物芯片点样仪是我们进入点样仪市场的第一步。经权衡决定暂不采用像Biorobotics的MGII那样多层可移动式载片台的复杂结构,从而确立了简捷稳固的单层固定式载片台
旋转周数rpm表示)的平方成正比。 因此,在转速固定不变的情况下,半径为12英寸的离心机的效率是半径为6英寸的2倍。而在半径相同的情况下,转速为1,000rpm时的离心效率是500rpm时的4倍。 离心机一般按尺寸、速度和应用来分类。相同大小的离心机还可以进一步按转头容量、离心管尺寸和样品数量等细分。离心速度(或相对离心力)是指施加到样品上的离心力,其大小选择与所需分离样品的性质有关。最高端的超速离心机可以分离各种分子、细胞组分,甚至同位素。随着转速的提高,一些平时难以区分的样品
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