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- 百奥莱博
- 北京
- WE0177
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
Blood Genomic DNA Midi Extraction Kit(1-5ml)
- 库存：
731
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
WE0177型柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)价格的品牌：百奥莱博，是优质的DNA纯化产品，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。
名称：WE0177型柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)价格
编号：WE0177
产地：国产|进口
规格：50次
英文名：Blood Genomic DNA Midi Extraction Kit(1-5ml)
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品采用柱式提取方法，可以处理1-5ml的全血，可纯化获得大小为100bp到50kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| Buffer RCL | 3×260ml |
| Buffer GR | 25ml |
| Buffer GL | 25ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml |
| Buffer GE | 15ml |
| 蛋白酶K | 50 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 5ml |
| 吸附柱DL及收集管 | 50套 |
保存条件：Buffer RCL 2～8℃，其他组分室温(15～30℃)
自备试剂：无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入5ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、本试剂盒最多可以提取1-5ml全血样品，如需提取大量血液样本请选用血液基因组非柱式提取试剂盒(#WE0176)。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请置于56℃水浴重新溶解。
6、如下游实验对RNA污染较敏感，可加入4μl DNase Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。
操作步骤：
1、向离心管(自备)中加入1-5ml血液样品，加入3倍体积的Buffer RCL轻轻涡旋或颠倒混匀。
2、3000 rpm(～900×g)离心10分钟，小心吸弃上清。
3、向沉淀中加入400μl Buffer GR，重悬沉淀。
注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。
4、1-2ml血液样本提取时,向以上溶液中加入40μl 蛋白酶K ，混匀；2-5ml血液样本提取时,向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
5、加入400μl Buffer GL，颠倒混匀15次，剧烈涡旋震荡至少1分钟。
注意：不要直接将蛋白酶K 直接加入到Buffer GL中。
6、70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：
1)如溶液未彻底清亮，补加适量蛋白酶K ，孵育。延长孵育时间至溶液完全清亮为止。
2)孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
7、加入400μl无水乙醇，颠倒混匀10次。短暂离心，使管壁和管盖上液体集中到管底。
8、将上步所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DL中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤9。
10、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。
11、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温下放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤12所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，12000rpm离心1min；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件：室温(15～30℃)。
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·SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)
编号：WE0289
英文名称：SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing，5×)
规格：5×2ml
SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)是以*酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于非还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。
注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本品不含还原剂如巯基乙醇或DTT。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤：
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。进行常规电泳。
储存条件：-20℃
WE0177型柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)价格关键词：柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml),Blood Genomic DNA Midi Extraction Kit(1-5ml),WE0177
·尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)
编号：WE0115
英文名称：Uracil-N-Glycosylase(UNG)
规格：200U|1000U
尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)也称为尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG酶)，通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，该蛋白分子量为25kD，可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，并且对RNA无活性，主要应用于防止PCR扩增产物的污染。该酶作用机理为：在PCR反应中以dUTP代替dTTP，扩增产物片段中的T全部被U取代，形成了含dU碱基的PCR扩增产物。UNG酶能选择性断裂单链和双链DNA中U碱基的糖苷键，降解反应体系中含U的DNA，有效消除PCR产物的残留污染，大大降低扩增产物污染导致的假阳性，从而保证扩增的特异性和准确性。
活性定义：37℃，60分钟内催化1 nmol尿嘧啶，从含尿嘧啶的DNA上释放所需要的酶量定义为一个单位。
质量控制：SDS-PAGE检测纯度大于95%；经检测无核酸内、外切酶活性。
注意事项：
1、UNG长期储存(非频繁使用; 每月少于3次)请置于-70℃保存，每天或每周使用请于-20℃保存。尽量避免反复冻融，大包装建议分装使用。
2、UNG可以在PCR反应前先清除不慎污染的U-DNA分子，一个实验室必须在所有的PCR反应中使用dUTP作为dNTP之一，使所有扩增产物都成为U-DNA。如单使用于某个检测，T-DNA仍会积累，此抗污染系统也难以起到完全的作用。
3、UNG/dUTP系统是PCR试剂内部的一种防污染措施，为了防止PCR产物的污染，尤其是在临检实验室中反复放大同一片段时，必须严格规范实验室的划分和操作。
使用方法：
以下举例为Taq反应体系防止PCR产物污染的使用方法，实际应用可应根据具体实验进行改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| Taq PCR Buffer，10× | 5μl | 1× |
| dATP，10 mM | 1μl | 200μM |
| dGTP，10 mM | 1μl | 200μM |
| dCTP，10 mM | 1μl | 200μM |
| dTTP，10 mM | 0.5μl | 100μM |
| dUTP，10 mM | 1μl | 200μM |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 0.2μM |
| Template DNA | Xμl | |
| Taq DNA Polymerase，5 U/μl | 0.5μl | 2.5 U/50μl |
| Uracil-N-Glycosylase，1 U/μl | 0.2μl | 0.2 U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
2、反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| UNG消化 | 37℃-50℃ | 5-10 min | |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 1 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意：通常将Taq酶与UNG酶按一定的比例加入PCR反应体系中，先于37℃-50℃范围内消化5-10分钟，然后95℃ 10分钟灭活，(同时这一步也达到预变性和热启动的效果)，随后进行PCR扩增。UNG酶的反应可以在37℃-50℃，5-10分钟的范围内变化，可以根据实验的需要进行调整。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购WE0177型柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)价格。
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全部提取出来，进行长期保存，满足长期、反复、多种研究的需要。 常见解决方案的缺点： 传统方法：对于范围在1-10ml的血样的DNA提取，传统的方法，用SDS，蛋白酶k消化，再用酚氯仿，反复抽提，此过程不但用到了有毒害的苯酚，氯仿，而且特别繁琐，费时间，耗费大量人力物力，并且接触毒害物质在当今社会已经越来越显得不可行。 离心柱方案和磁珠方案： 商品化的离心柱型分离方法或者磁珠分离方案，因为一次处理量太大，要满足中量、大量血液DNA提取的磁珠或者离心柱型的解决方案，在成本
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