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大肠杆菌Stbl3化学感受态细
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908
E.coli Stbl3 Chemical Competent Cell
长期
北京百奥莱博科技有限公司
干冰运输、-80℃保存
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞厂家品牌:百奥莱博编号:BTN121112产地:国产|进口规格:0.1mL*10英文名:E.coli Stbl3 Chemical Competent Cell本产品是衍生自大肠杆菌HB101菌株,经特殊工艺处理得到的感受态细胞。特别适用于克隆不稳定载体片段,如含有同向重复序列的慢病毒DNA和其他反转录病毒载体。使用pUC19质粒检测,本产品转化效率可达108。产品特点:1. 本产品是常规质粒制备的宿主菌,可进行蓝白斑筛选。2. 本产品是复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株,对慢病毒载体等较大的质粒转化的效果好,能够有效抑制长片段末端重复区的重组,减低错误重组的可能性。3. 非常稳定,能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。菌株基因型:F– mcrB mrr hsdS20(rB–,mB–)recA13 supE44 ara-14 galK2lacY1 proA2 rpsL20(StrR)xyl-5 λ– leu mtl-1储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。使用方法:1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μL感受态细胞为例。2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。注意事项:1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。关于大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞厂家的更详细说明,请致电我公司咨询,我们将以最饱满的热情为您提供解答,此外,我公司专业供应下列产品:·核酸印迹膜染液编号:BTN70104英文名称:Nucleic Acid Membrane Stain规格:250mL本产品可以对已经转移到印迹膜上的DNA和RNA进行快速染色,在不需要UV等仪器条件下确认转膜效果。可以用于Southern、Nothern和碱变性胶印迹膜。产品特点:1. 无毒环保,来于一种常用的灭菌剂。2.快速方便,5-10染色即可直接照相保存或扫描保存。3.可逆,可被预杂交液中的SDS 洗脱,不影响后续杂交反应。4. 灵敏度为20 ng/条带(包括DNA和RNA),跟EB相当。5.跟各种印迹膜兼容,可用于Gene-Screen、BioTrace RP、Zeta-Probe、Nytran、Hybond、Duralon等尼龙膜,也可用于PVDF 膜和硝酸素膜时背景稍高)。6.可以反复使用。储存条件:常温运输和保存,有效期一年。使用方法:1. 按常用的印迹法、电转法等方法将电泳胶中的DNA或RNA转移到印迹膜上并根据印迹膜的性质进行UV 交联或加热烘烤,将核酸固定。2. 如果是RNA甲醛变性胶的印迹膜,最好用去离子水洗涤印迹膜30秒钟以除去甲醛(甲醛会干扰染色)3. 将湿润的印迹膜浸入到装有足够印迹膜染液(本产品)的容器中。如果印迹膜很干,则需要先用1×SSPE或1×SSC溶液湿润。4.室温下轻柔摇晃染色5-10分钟。印迹膜上DNA或RNA量大时染色时间可能不需要5分钟,染色时间过长背景会增加。5. 将染液倒回到试剂瓶中以备下次使用。6. 用自备的去离子水清洗印迹膜三次,每次5-10秒。DNA或RNA 条带将呈现蓝色,背景将呈现淡蓝色。注意:洗涤时间不要太长,否则固定在印迹膜上的核酸在低盐条件下(在去离子水中)容易脱落。7. 用滤纸吸去多余的水份,此时可以用铅笔在印迹膜上作标记(Southern杂交膜可以标记DNA分子量标准的位置,Northern杂交膜可以标记18S和28S RNA的位置,它们分别对应于2 Kb和5 Kb的大小),也可以将印迹膜放在白色背景下照相(最好使用黄色滤光片)或者扫描以保存实验结果。8. 如果预杂交液中有SDS,则印迹膜不需要脱色,可以直接用于预杂交。 如果预杂交液中不含SDS,需将染色后的印迹膜浸入到含1% SDS的1×SSPE或1×SSC溶液中在室温下摇晃直到颜色脱去,一般需要15分钟。使用效果:图注:3μg总RNA和0.24-9.5Kb RNAladder(左)转移到Nytran膜上面后用本产品染色的效果图。大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞厂家关键词:E.coli Stbl3 Chemical Competent Cell,大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞,BTN121112核糖核酸(酵母) Menthol 63231-63-0对硝基*(代"*")-N-乙酰-β-D-*基葡萄糖苷 DOC acetate 3459-18-5BTN70303 绿如蓝核酸染料(UV型) DNAGREEN(UV)淀粉样物质染色液(改良Stores刚果红法) 4×50ml对称二*乙炔 Fmoc-Met-OH 501-65-5β-巯基乙*(代"胺") L-Gulose 60-23-1PY01-179 玫红酸 BS 25克 F030502 FITC标记小鼠抗乙肝e抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBeAg*FITCBTN70902 甜菜碱溶液,5M,PCR级 Betaine Solution, PCR GradeARB11786 人叠氮胸苷(AZT)血清中含量检测 Human azidothymidine,azt ELISA KITARB11265 人骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)定量分析 Human bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,bmpr-Ⅱ ELISA KITBTN131115 OPD干粉 OPD PowderD2000 II DNA ladder(100-2000bp) 100次ARB14199 大鼠P-糖蛋白(P-gp)酶标法分析 磺胺嘧啶* HFIP 547-32-054-62-6 Aminopterin *基喋呤姬姆萨染色液(1:9) Giemsa stain 100ml|500mlD-谷*酰胺 L-Cystathionine 5959-95-5玫瑰红三羧酸铵 Indoxyl-Glucoside 569-58-4BL0279 胰蛋白酶-EDTA含酚红大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞厂家关键词:E.coli Stbl3 Chemical Competent Cell,大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞,BTN121112·细胞核蛋白提取试剂盒编号:BTN130890英文名称:Nuclear Protein Extraction Kit规格:50次·绿如蓝核酸染料(可见光型)编号:BTN121002英文名称:DNAgreen(Visible Light)规格:10mL本品是国内首款可见光核酸染料,用于电泳时替代EB,在可见光下观察DNA或RNA的电泳。产品特点:1. 无毒。对人体和环境没有任何毒害,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。2. 实时染色。可以在电泳过程中实时观察DNA和RNA的泳动,不需要任何额外的仪器设备或光源。注:本产品在紫外条件下不发光。3. 由于避免了UV 对DNA的伤害,胶回收片段的克隆效率比UV下回收的片段高2-10倍,非常适用于PCR或酶切回收。4. 稳定。对光、水和热的稳定性很好,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。5. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。6. 使用方法多样。既可以电泳中染色,也可以电泳后染色;既可用于琼脂糖胶,还可用于PAGE。7.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如超快核酸电泳液、TBE、TAE)兼容,但在超快核酸电泳液中背景最低。储存条件:常温运输和保存(长期保存最好放4℃),保存期限一年。使用方法之一:电泳中染色(琼脂糖电泳时使用)1.在 100mL 融化的琼脂糖凝胶加入100μl 本产品,充分混合均匀后倒胶,凝固后凝胶将呈淡紫色。本产品不能跟其他任何核酸染料同时使用(如EB和SYBR Green I),否则会相互干扰,不会出现任何条带。使用时请严格按照此比例加入染料,否则将出现糊带现象。2. 将凝固的琼脂糖凝胶放在 5分钟超快核酸电泳液、TEB或TAE中。为节约染料,不推荐将染料加到电泳缓冲液中。3. 将DNA样品与6×A型DNAload 按5:1的比例混合后上样,由于本染料比EB 灵敏度稍低,所以DNA的上样量和DNA Marker的上样量最好比使用EB染料时多1倍。 注意:不推荐使用常规的含*酚蓝和二甲*蓝的上样液,因为这些染料的颜色跟DNA和RNA的颜色都将呈蓝色,将严重干扰条带的观察和解读。本产品提供的6×A型DNAload 只含相当于50bp大小的红色染料,不会干扰蓝色DNA和RNA 条带的观察。4.电泳,电泳参数同常规的电泳。跑在前面的是红色的电泳示踪染料(来于上样液),其泳动速度相当于50bp的DNA。5. 直接在光线明亮的位置直接观察电泳的进行,DNA和RNA 将呈现蓝色条带。如果有观察X光片用的灯箱,可以将电泳中的电泳槽或电泳后的凝胶平放在铺有塑料布的灯箱发光面的上面观察效果更佳。典型电泳结果如下:6. 如果要回收DNA,则关闭电泳后直接切下所需条带,其余回收过程同常规方法。使用方法之二:电泳后染色(PAGE胶染色必须使用电泳后染色法,琼脂糖电泳也可以选择本方法。不论是PAGE胶还是琼脂糖胶,本方法所需染料的用量比电泳中染色大2-10倍)7. 按照常规方法进行 PAGE电泳或琼脂糖电泳。8. 用电泳液将本产品稀释100-500倍(100mL 水需要加0.2-1mL 本产品),将胶放入,室温下摇晃染色1-10分钟即可看见蓝紫色的DNA和RNA条带。具体染色多长时间取决于DNA和RNA的浓度。9.染色液可以避光放4℃保存,能反复使用数次。疑难解答:Q:为何电泳的前沿出现下图这种只出现一条带的情况呢?A: 这是由于样品中有大量RNA小片段污染(基因组DNA提取时没有RNase处理的话常常会有大量RNA污染),这些小片段裹走了凝胶中的染料,使其后面的凝胶区域没有染料,因此后面的大片段没法染色。建议电泳后再染色观察大片段。Q: 本产品可否用于RNA染色?A:可以,也呈蓝紫色条带。Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?A:不行,本产品只能直接加入琼脂糖凝胶中进行染色或PAGE电泳后再染色。Q:为何电泳时间长的话前端的DNA和RNA 条带很淡或根本看不见?A:跟EB一样,电泳时本产品朝负极方向移动,当前端的DNA(最小片段)进入没有染料的区域时,已经跟DNA或RNA 结合的染料分子会逐渐脱落,所以条带会变淡或看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色。Q:本产品在哪种缓冲液中效果最好?A:本产品跟各种电泳缓冲液兼容,但背景最浅的是中超快核酸电泳液。
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