抗GAPDH单克隆抗体批发

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")抗GAPDH单克隆抗体批发，我公司供应的抗体抗原品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：抗GAPDH单克隆抗体批发
规格：100μl
英文名：Anti GAPDH Mouse Monoclonal Antibody
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱*酶)是参与糖酵解的一种关键酶，由4个36kDa的亚基组成。除参与糖酵解外，有证据表明哺乳动物细胞中的GAPDH参与了多种胞内生化过程，包括膜融合(membrane fusion)、微管成束(microtubule bundling)、磷酸转移酶(phosphotransferase)激活、核内RNA出核、DNA复制与DNA修复等。GAPDH蛋白几乎在所有组织中都高水平表达，常用于Western Blot检测中校正系统的内参。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG
免疫原：纯化的GAPDH蛋白
应用范围：WB(1：500-5000)
应用种属：人、小鼠、大鼠、兔、猪，鸡、拟南芥

抗GAPDH单克隆抗体批发正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·双链DNA荧光定量试剂盒
编号：WE0235
英文名称：dsDNA Assay Kit for Qubit
规格：100次|500次
  本试剂盒是一种简便、灵敏、精确的双链DNA(dsDNA)荧光定量检测试剂盒。本试剂盒包含即用型荧光检测试剂和相关的dsDNA标准品。本试剂盒对dsDNA具有高度选择性，在0.2~100ng区间具有很好的线性关系，是一种快速、简单、灵敏的DNA定量方法。
  本试剂盒操作简单方便，使用时只需将即用型荧光检测试剂与待测dsDNA样品混合，即可使用荧光酶标仪或Qubit®荧光仪进行读数。操作简单，结果可靠，是二代测序大规模DNA样品定量的理想选择。本试剂盒对一些常规的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。

·高效热启动DNA聚合酶
编号：WE0123
英文名称：SuperStar DNA Polymerase
规格：500U|2500U
  本产品是一种采用最新封闭技术的Taq DNA Polymerase，适用于HotStart PCR。在70℃以下，酶的活性中心被完全封闭，有效抑制了聚合酶活性，并能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。在95℃条件下孵育5分钟后，酶的部分活性得以释放。随着热循环的不断进行，剩余的酶活会源源不断地释放出来，这就使得此酶克服了常规Taq酶容易出现平台期的弊端，其扩增效率大大提高。
  本品进行PCR扩增时，PCR产物3"末端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆。本产品具有扩增速度快、特异性好、稳定性好的特点，主要应用于对扩增产物要求量大的PCR和RT-PCR反应。

产品组成：

 

组份	500U	2500U
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50 μ l
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意： 可以在室温下配制反应液，最好将试剂置于冰上。引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	94℃	0.5-1 min	25-35个循环
退火	50-68℃	0.5-1 min
延伸	72℃	1 min
终延伸	72℃	10 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的SuperStar DNA Polymerase的延伸速率为1 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


抗GAPDH单克隆抗体批发关键词：WE0356,AP标记重组GAPDH抗体,小鼠抗重组GAPDH,抗GAPDH单克隆抗体


·Pfu DNA Polymerase
编号：WE0107
英文名称：Pfu DNA Polymerase
规格：500U
  Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具有纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性，对于高GC含量模板，提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。

产品组成：

组份	500U
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一个月，无明显活性改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


抗GAPDH单克隆抗体批发关键词：WE0356,AP标记重组GAPDH抗体,小鼠抗重组GAPDH,抗GAPDH单克隆抗体


·HRP标记兔抗山羊IgG(H+L)
编号：WE0387
英文名称：Rabbit Anti-Goat IgG, HRP Conjugated
规格：100μl
本产品为辣根过氧化物酶标记的经亲和纯化的兔抗体，特异识别山羊IgG，检测灵敏度高，本底低，可用于Western Blot、ELISA和免疫组化检测。HRP(Horseradish Peroxidase)即辣根过氧化物酶，可以催化DAB、TMB等底物显色或催化ECL等化学发光试剂产生化学反应而发光。

免疫原：山羊IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：无
防腐剂：无(叠氮*是HRP抑制剂，抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围：
WB(1：2000-10000)
ELISA(1：2000-20000)
IHC(1：100-200)

·抗GST标签琼脂糖介质
编号：WE0331
英文名称：Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin
规格：100μl|500μl
抗GST标签免疫亲和介质是将抗GST标签的单克隆抗体共价偶联到琼脂糖上，这种琼脂糖能进行免疫沉淀或者免疫共沉淀，能检测含有GST标签的蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成多肽序列
应用范围：IP

·GST琼脂糖凝胶
编号：WE0269
英文名称：Glutathione-Sepharose Resin
规格：10ml
  本产品为基于三甘醇(16原子间隔臂)的谷胱甘肽琼脂糖，可快速、温和、特异性地纯化包含谷胱甘肽结合序列的非变性蛋白质，如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶等，尤其适用于在大肠杆菌、昆虫细胞和哺育动物细胞中表达的GST融合表达蛋白。该填料具有很好的物理和化学稳定性，使用寿命长，使用方便，批次重复性好，可一步分离得到纯度较高的目标蛋白，纯化条件温和，可保证蛋白的活性。

支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：5-10 mg GST标签蛋白/ml 填料
粒径：50-160μM

注意事项：
1、请勿将 GST琼脂糖凝胶冷冻、干燥和离心，整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
2、蛋白层析应使用高纯度的试剂和水，层析前缓冲液应用0.45μM滤膜过滤后使用。另外为防止柱子阻塞，上柱前建议将裂解液进行离心，或者使用0.45μM滤膜过滤。
3、GST 融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，为获得最大结合量，上样流速建议为：0.2-1ml/min(6ml层析柱)，0.5-2ml/min(12ml层析柱)。对于吸附效果不好的样品，可以先把介质和样品混合，轻轻振摇 2-4小时，再装柱，用平衡缓冲液进行重新平衡、洗脱等操作，另外在细菌抽提试剂中添加5 mM DTT，可以显著提高GST标签结合能力。
4、不同的 GST 融合蛋白取得最佳纯化效果所需还原型谷胱甘肽浓度、洗脱体积和洗脱时间可能有所不同。必要时需对流穿液、洗脱液进行 SDS-PAGE 以及 Western 杂交分析，以确定最佳纯化条件。
5、GST 融合蛋白以包涵体形式存在时不能与介质结合，必须先进行变性、复性、透析处理后才能用介质进行纯化。建议优化蛋白表达条件尽量使蛋白可溶性表达。
6、如后续实验需要除去洗脱液中还原型谷胱甘肽，可采用超滤或透析的方法。

使用方法：

I 缓冲液的准备
1、结合缓冲液(PBS)：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，pH7.4
2、洗脱缓冲液：10 mMNa2HPO4，1.8 mMKH2PO4，140 mMNaCl，2.7 mMKCl，10 mM还原型谷胱甘肽(GSH)，pH7.4。将0.1 g还原型谷胱甘肽(GSH)溶于30ml 结合缓冲液，或将0.25 g溶于75ml结合缓冲液中。
3、再生缓冲液1：0.1 MTris-HCl，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH8.5
4、再生缓冲液2：0.1 M Sodiumacetate，0.5 MNaCl，0.1% SDS，pH4.5

II 样本制备
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加1-5ml细菌蛋白抽提试剂(每1ml细菌蛋白抽提试剂中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物)，如有需要可以超声裂解菌体。
注意：
1)当提取物粘度高时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μlDNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(WE0214)、 DNase I(WE0213A)，或直接从我公司购买WE0261细菌蛋白抽提试剂盒，包含细菌蛋白抽提试剂、DNase I、Lysozyme和蛋白酶抑制剂混合物。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致溶液过热，可分成短时间，多次超声，最终以菌液变清即可。
2、10000rpm，4℃离心15分钟，将上清转移至新的已预冷的离心管中，然后用预冷的PBS Buffer重悬沉淀(每50ml裂解液的沉淀加入3ml PBS)。
3、分别取10μl上清和沉淀悬液进行SDS-PAGE电泳检测，以确定蛋白存在于上清或沉淀中。若目的GST融合蛋白形成包涵体(不可溶蛋白)，应在纯化以前以适当的方式进行溶解和重折叠。

III 组装层析柱
1、将Glutathione-Sepharose Resin混合均匀直至重悬，用吸管移取适量的填料至层析柱中。室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护液，将填料与乙醇一起混匀，以每ml填料纯化5-10 mg GST标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇混合液加入层析柱中。
2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2、加入5倍柱体积的去离子水洗涤，再用10倍柱体积的结合缓冲液平衡，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。

Ⅳ GST融合蛋白的纯化
1、将层析柱的出口连接上紫外蛋白监测仪，根据紫外蛋白监测仪观察280 nm处的吸收值来监控层析柱流出蛋白情况。
2、上样：将制备的蛋白样品用结合缓冲液等体积稀释后，加入到已平衡好的层析柱中，建议上样流速为： 0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。观察280 nm吸收情况并收集流穿蛋白。
注意：
1)样品在上柱前可以离心或0.45μM微孔滤膜过滤。或者使用本试剂盒中附带的一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子的作用。再将处理好的样品负载上柱，但是筛板放入柱子后就不易取出。
2)通过控制加入的菌体裂解液的速度或流出速度来控制柱流速，流速过快会影响柱效。
3、洗涤：使用10倍柱体积的结合缓冲液过柱，洗涤杂蛋白，观察280 nm吸收情况并收集杂蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。
注意：建议洗涤液中加入蛋白酶抑制剂终浓度为1mM，如蛋白酶抑制剂混合物，以抑制蛋白酶活性。
4、洗脱：使用10-15倍柱体积的新鲜配制的洗脱缓冲液过柱，洗脱目的蛋白，观察280 nm吸收情况并收集目的蛋白。建议洗涤流速为0.5-1ml/min(6ml层析柱)，1-2ml/min(12ml层析柱)。
5、蛋白检测：分别取等量的流穿液，洗涤液和目的蛋白洗脱液进行SDS-PAGE以分析蛋白的层析情况。
6、洗脱后，依次用3-5倍柱体积的结合缓冲液和3-5倍柱体积的去离子水洗涤填料，再用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。

Ⅴ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有下降，可用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用5倍柱体积的再生缓冲液1洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。
2、使用5倍柱体积的再生缓冲液2洗涤填料，而后用5-10倍柱体积超纯水洗涤。
3、保存：使用2-3倍柱体积的20%乙醇洗涤，将层析柱的头尾密封后(乙醇要将填料浸没)2～8℃保存。
4、再次使用时加入5倍柱体积的去离子水将乙醇洗涤后，使用10倍柱体积的结合缓冲液平衡填料，平衡结束后即可上样。

储存条件：2～8℃，避免冷冻

北京百莱博科技有限公司专业生产一抗产品，欢迎来电咨询选购抗GAPDH单克隆抗体批发。