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重组腺病毒包装
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汉恒生物
重组腺病毒(AdV)
重组腺病毒(AdV)是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(Ad5),其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。
重组腺病毒特点:
1.感染范围广:腺病毒可适用于普通细胞系的感染,也可用于悬浮细胞、原代细胞等。
2.感染效率高:腺病毒的滴度可高达1011PFU/ml,感染效率高,可感染悬浮细胞、原代细胞等。
3.载体容量大:腺病毒的载体容量较大,最高可达8kb。
产品分类
● 普通Ad5重组腺病毒-适用普通细胞系感染;
● 原代细胞专用腺病毒-适用各种原代细胞基因转导;
● 悬浮细胞专用腺病毒-专为悬浮细胞特殊设计,也兼容普通细胞和原代细胞,效率更高;
腺病毒感染实例
腺病毒感染贴壁细胞

mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒感染HCT116和HT29, 汉恒客户2017年发表于CELL,IF>30
腺病毒用于动物实验
腺病毒纯化的滴度可达到1011PFU/ml,用于动物实验。

小鼠眼部结膜下注射纯化腺病毒Ad-SIRT1和对照AdGFP:PFU=1011/ml,3 μl/single eye;48hr后观察GFP表达。
腺病毒感染原代细胞
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文献和实验客户发表文章节选:
Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy
(杂志:CELL,IF=41.582,上海交通大学附属仁济医院)
Local hyperthermia therapy induces browning of white fat and treats obesity
(杂志:CELL,IF=41.582,华东师范大学)
TRIB3 Promotes APL Progression through Stabilization of the Oncoprotein PML-RARa and Inhibition of p53-Mediated Senescence
(杂志:Cancer Cell,IF=31.743,中国医学科学院)
An ALOX12–12-HETE–GPR31 signaling axis is a key mediator of hepatic ischemia–reperfusion injury
(杂志:NATURE MEDICINE,IF=30.641,武汉大学)
WWC proteins mediate LATS1/2 activation by Hippo kinases and imply a tumor suppression strategy
(杂志:MOLECULAR CELL,IF=17.970,复旦大学儿童医院)
E3 ubiquitin ligase RNF5 protects against hepatic ischemia reperfusion injury by mediating PGAM5 ubiquitination
(杂志:HEPATOLOGY,IF=17.425,郑州大学第一附属医院)
SIRT3 Acts As a Negative Regulator of Autophagy Dictating Hepatocyte Susceptibility to Lipotoxicity
(杂志:HEPATOLOGY,IF=17.425,浙江大学)
atg7-Based Autophagy Activation Reverses Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity
(杂志:Circulation Research,IF=17.367,北京中医药大学)
Protective effect of HINT2 on mitochondrial function via repressing MCU complex activation attenuates cardiac microvascular ischemia–reperfusion injury
(杂志:Basic Research in Cardiology,IF=17.165,复旦大学附属中山医院)
AKAP1 Deficiency Attenuates Diet-Induced Obesity and Insulin Resistance by Promoting Fatty Acid Oxidation and Thermogenesis in Brown Adipocytes
(杂志:Advanced Science,IF=16.806,空军军医大学)
病毒质粒 4. 重组穿梭载体的线性化、电转 5. 重组腺病毒质粒的判定 Page 8: 1. 重组腺病毒质粒的判定 2. 腺病毒的保存 3. 腺病毒DNA转染的观察及腺病毒的传代 4. BJ5183中质粒的提取 5. 重组腺病毒包装的判定 6. IRES表达双基因 7. BJ5183抗性 Page 9: 1. 细胞转染后观察与病毒传代 2. 阳性腺病毒质粒的转化、增殖、提取、纯化 3. 重组腺病毒质粒的判定 4. CPE与腺病毒包装判定 Page 10: 1. 重组腺
场景: 【体外】构建稳定过表达/敲降/敲除的细胞系。 【体外】对原代细胞、干细胞进行长期的基因功能研究。 【体内】在某些需要长期表达且对免疫反应要求不极端的动物模型中 (如部分脑区注射),但需注意其扩散能力有限。 图 1.慢病毒包装、转导与基因整合[1]。 腺病毒——“高效瞬转的急性子” 腺病毒是无包膜的双链 DNA 病毒。它通过其纤维蛋白与细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体 (CAR) 等结合进入细胞,但其 DNA 不整合到宿主基因组中
(1)原理 腺病毒(adenovirus,AV)是一种没有包膜的线状双链DNA,它能感染分裂细胞和非分裂细胞,在核内以神经元细胞的形式复制,存在多种AV血清型。到目前为止,构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方法取代E1或E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制,因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒载体能够高效传递和表达基因的能力(尤其是在体外),由于具有宿主范围广,对人致病性低;在增殖和非增殖细胞中感染和表达基因;能有效
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