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重组腺病毒（AdV）
重组腺病毒（AdV）是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一个完整的病毒生活周期会引发细胞死亡从而释放出病毒粒子。
重组腺病毒特点：
1.感染范围广：腺病毒可适用于普通细胞系的感染，也可用于悬浮细胞、原代细胞等。
2.感染效率高：腺病毒的滴度可高达1011PFU/ml，感染效率高，可感染悬浮细胞、原代细胞等。
3.载体容量大：腺病毒的载体容量较大，最高可达8kb。
产品分类
● 普通Ad5重组腺病毒-适用普通细胞系感染；
● 原代细胞专用腺病毒-适用各种原代细胞基因转导；
● 悬浮细胞专用腺病毒-专为悬浮细胞特殊设计，也兼容普通细胞和原代细胞，效率更高；
腺病毒感染实例
腺病毒感染贴壁细胞
mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒感染HCT116和HT29， 汉恒客户2017年发表于CELL，IF＞30
腺病毒用于动物实验
腺病毒纯化的滴度可达到1011PFU/ml，用于动物实验。
小鼠眼部结膜下注射纯化腺病毒Ad-SIRT1和对照AdGFP：PFU=1011/ml，3 μl/single eye；48hr后观察GFP表达。
腺病毒感染原代细胞
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文献和实验Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy
（杂志:CELL，IF=41.582，上海交通大学附属仁济医院）
Local hyperthermia therapy induces browning of white fat and treats obesity
（杂志:CELL，IF=41.582，华东师范大学）
TRIB3 Promotes APL Progression through Stabilization of the Oncoprotein PML-RARa and Inhibition of p53-Mediated Senescence
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An ALOX12–12-HETE–GPR31 signaling axis is a key mediator of hepatic ischemia–reperfusion injury
（杂志:NATURE MEDICINE，IF=30.641，武汉大学）
WWC proteins mediate LATS1/2 activation by Hippo kinases and imply a tumor suppression strategy
（杂志:MOLECULAR CELL，IF=17.970，复旦大学儿童医院）
E3 ubiquitin ligase RNF5 protects against hepatic ischemia reperfusion injury by mediating PGAM5 ubiquitination
（杂志:HEPATOLOGY，IF=17.425，郑州大学第一附属医院）
SIRT3 Acts As a Negative Regulator of Autophagy Dictating Hepatocyte Susceptibility to Lipotoxicity
（杂志:HEPATOLOGY，IF=17.425，浙江大学）
atg7-Based Autophagy Activation Reverses Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity
（杂志:Circulation Research，IF=17.367，北京中医药大学）
Protective effect of HINT2 on mitochondrial function via repressing MCU complex activation attenuates cardiac microvascular ischemia–reperfusion injury
（杂志:Basic Research in Cardiology，IF=17.165，复旦大学附属中山医院）
AKAP1 Deficiency Attenuates Diet-Induced Obesity and Insulin Resistance by Promoting Fatty Acid Oxidation and Thermogenesis in Brown Adipocytes
（杂志:Advanced Science，IF=16.806，空军军医大学）
（细菌内同源重组AdEasy System）一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）步骤1、选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒，以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 （1）从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作 （细菌内同源重组 AdEasy System ） 一 目的基因的克隆（以 pshuttle-CMV 质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。 4.
（一） 构建重组腺病毒载体的目的 1. 增加外源基因的装载容量 我们知道，腺病毒有一定的包装容积限制，大约在75~105%，即28~40kb左右，若超出此范围则或是不能包装或是发生分子重排。以5型腺病毒基因组36kb计算，在不对腺病毒基因组作任何改变的情况下，腺病毒载体最多可以转运2.8kb左右的外源基因，这对于许多基因治疗方案来说是远远不够的。为了进一步地扩大腺病毒载体的应用范畴，有必要缺失其基因组中的某些反式作用元件以增大其装载容积。 2. 降低免疫原性 如前
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