猪乙型脑炎病毒荧光PCR检测试剂盒(JEV)北京厂家

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猪乙型脑炎病毒荧光PCR检测试剂盒(JEV)北京厂家是高品质的动物疫病PCR检测试剂盒产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多猪乙型脑炎病毒荧光PCR检测试剂盒(JEV)等动物疫病PCR检测试剂盒产品请联系我司咨询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应猪乙型脑炎病毒荧光PCR检测试剂盒(JEV)北京厂家，产品信息：

类别：动物疫病PCR检测试剂盒

产品名	产品编号	等级含量	包装规格
猪乙型脑炎病毒荧光PCR检测试剂盒(JEV)	SYA419	科研试剂	48次/盒|96次/盒

规格：48次/盒|96次/盒

产地：国产|进口

等级：科研试剂

编号：SYA419

一、简介：

该方法采用一步法荧光qRT-PCR，反应在同一管内连续进行，操作简单，并有效防止了污染，能对样品中的猪乙型脑炎病毒进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。

 

二、用途：

该试剂盒适合于检测发病动物血液、脑脊液、组织以及病毒细胞培养液等标本中猪乙型脑炎病毒(JEV)RNA，适用于猪乙型脑炎病毒(JEV)感染的辅助诊断。

 

三、试剂盒组成：(48T)

组份 数量 规格

JEV荧光qRT-PCR反应液(JEV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管

酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管

无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管

阴性对照(NTC) 1管 50μL/管

阳性对照(JEV-PTC) 1管 50μL/管

 

四、储存条件及有效期：

本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

 

五、荧光PCR仪器适用范围：

ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

6、样品的采集与RNA提取

6.1 样品的采集

适用标本类型：发病动物的血液、体液、脑脊液、组织以及病毒培养物等标本。

6.1.1 组织：取发病组织约1g，置入1.5mL洁净EP管，立即送检。

6.1.2 血液、体液、脑脊液及病毒培养物：血液，无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管；体液、脑脊液及病毒培养物液等，无菌条件下取0.5-1mL左右，置入1.5mL洁净EP管，立即送检。

6.2 RNA提取

可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。

 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL 加入到反应体系中即可。

由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

 

七、检测步骤：

7.1 试剂的准备

从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(JEV-qRT-PCR MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，测试反应体系配制如下：

试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 14µL N×14µL

酶混合液 1µL N×1µL

总量 15µL N×15µL

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(JEV-PTC)5μL，10000rpm 瞬时离心10秒。

7.2 qRT-PCR反应条件

将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min

预变性 1循环 95℃ for 10 min

PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec

60℃ for 45 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

 

八、结果分析：

8.1 结果分析条件设定

直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。

8.2 试验成立判定

(1)阴性对照(NTC)： 不应产生任何的扩增曲线。

(2)阳性对照(JEV-PTC)：均产生扩增曲线。

(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。

8.3 结果判定

(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明JEV核酸阳性。

(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明JEV核酸阴性。

(3)如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。

(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行JEV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明JEV核酸阳性；否则判为样本阴性。

 

九、注意事项：

(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。

(2)所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。

(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。

(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。

(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

 

猪乙型脑炎病毒荧光PCR检测试剂盒(JEV)北京厂家专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

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