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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃,避免反复冻融
- 保质期:
长期
- 英文名:
MMLV cDNA Synthesis Kit
- 库存:
332
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京现货高效cDNA第一链合成试剂盒特价促销的品牌:百奥莱博,是优质的核酸扩增(PCR)产品,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多高效cDNA第一链合成试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。
名称:高效cDNA第一链合成试剂盒
编号:WE0131
品牌:百奥莱博
规格:100次
英文名:MMLV cDNA Synthesis Kit
本试剂盒是专为两步法RT-PCR第一步实验配制的cDNA第一链合成试剂盒。本产品包含从RNA模板逆转录成cDNA第一链所需的所有试剂,其中包括MMLV逆转录酶、反应缓冲液、引物、dNTP等。经过突变改造的MMLV逆转录酶RNase H活性缺失,减少了逆转录反应中RNA的降解,更容易获得全长的cDNA。MMLV逆转录酶热稳定性强,可得高产量的cDNA,使用简单方便。本系统对后续的PCR以及定量PCR试验兼容性高,适用各种PCR反应的DNA聚合酶。
试剂盒组成:
| 组份 | 100次 |
| MMLV,200 U/μl | 100μl |
| 5×RT Buffer | 500μl |
| Primer Mix | 240μl |
| dNTP Mix,2.5 mM Each | 500μl |
| DTT,0.1 M | 240μl |
| RNase-Free Water | 1ml |
产品特点
1、RNase H-:经突变的MMLV逆转录酶,RNase H活性缺失,更易获得全长cDNA。
2、使用方便:试剂盒包含除RNA模板外的逆转录所需全部试剂。
注意事项:
1、在操作过程中应避免RNase污染,防止RNA降解或实验中的交叉污染,建议在专门的区域进行RNA操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并在120℃下高压灭菌30分钟后使用,或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃,避免反复冻融。
4、若起始RNA的量小于50ng,建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0223。
操作步骤:
注意:10ng-5μg总RNA可建立20μl反应体系,如果总RNA量大于5μg,请按比例扩大反应体系。
I.逆转录操作步骤:
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系,总体积为20μl。
| 试剂 | 20μl反应体系 | 终浓度 |
| dNTP Mix,2.5 mM Each | 4μl | 500μM Each |
| Primer Mix | 2μl | |
| RNA Template | Xμl | 1ng-5μg |
| 5×RT Buffer | 4μl | 1× |
| DTT,0.1 M | 2μl | 10 mM |
| MMLV,200 U/μl | 1μl | |
| RNase-Free Water | up to 20μl |
注意:
1)若起始RNA的量小于50ng,则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。
3、涡旋震荡混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分钟,85℃孵育5分钟。反应结束后,短暂离心,置于冰上冷却。
5、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应,或置于-20℃长期保存。
II.若逆转录效率低,或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时,建议采用以下步骤:
1、将RNA模板、引物、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、MMLV和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系,总体积为13μl 。
| 试剂 | 20μl反应体系 | 终浓度 |
| dNTP Mix,2.5 mM Each | 4μl | 500μM Each |
| Primer Mix | 2μl | |
| RNA Template | Xμl | 1ng-5μg |
| RNase-Free Water | up to 13μl |
3、70℃孵育10分钟,迅速冰浴2分钟。
4、短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
5、继续向以上反应液中加入以下试剂:
| 试剂 | 20μl反应体系 | 终浓度 |
| 5×RT Buffer | 4μl | 1× |
| DTT,0.1 M | 2μl | 10 mM |
| MMLV(200U/μl) | 1μl |
注意:
1)若起始RNA的量小于50ng,则建议加入RNA酶抑制剂(RNasin)。本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0223。
2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。
6、轻轻吹打混匀,42℃孵育50分钟,85℃孵育5分钟。
7、反应结束后,短暂离心,置于冰上冷却。
8、逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应,或置于-20℃长期保存。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
关键词:WE0131,高效cDNA第一链合成试剂盒,MMLV cDNA Synthesis Kit
北京现货高效cDNA第一链合成试剂盒特价促销极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
| 编号 | 名称 |
| WE0263 | 酵母蛋白抽提试剂盒 |
| WE0294 | Western Ladder笔 |
| WE0296 | 一步法Western专用封闭液 |
| WE0302 | 定影粉 |
| WE0274 | 蛋白标准溶液BSA |
| WE0301 | X光暗盒(12.7cm×17.8cm) |
| WE0329 | 抗c-Myc标签抗体琼脂糖介质 |
| WE0196 | 固定组织RNA提取试剂盒 |
| WE0238 | T4 DNA聚合酶 |
| WE0245 | 1kb DNA Ladder |
| WE0353 | 抗β-Actin单克隆抗体(植物) |
| WE0267 | His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白) |
| WE0383 | Cy3标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
| WE0257 | RIPA裂解液(中) |
| WE0200 | 植物RNA提取试剂盒(含DNase I) |
| WE0180 | 粪便基因组DNA提取试剂盒 |
| WE0347 | 抗GFP标签多克隆抗体 |
| WE0242 | UltraStain DNA Marker |
| WE0345 | 抗GST标签多克隆抗体 |
| WE0260 | 组织蛋白抽提试剂盒 |
| WE0339 | 抗RFP标签单克隆抗体 |
| WE0303 | 显影粉 |
| WE0400 | 口腔拭子DNA样本保存管 |
| WE0122 | FastStar热启动DNA聚合酶 |
| WE0374 | 罗丹明山羊抗大鼠IgG(H+L) |
| WE0179 | 口腔拭子基因组DNA提取试剂盒 |
| WE0189 | 高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法) |
| WE0259 | 蛋白酶抑制剂混合物 |
| WE0384 | FITC标记山羊抗兔IgG(H+L) |
| WE0150 | 一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料) |
| WE0160 | 超纯dNTP混合液(10 mM) |
| WE0247 | TA快速连接试剂盒(pUC-T Simple)(含载体,连接酶) |
| WE0230 | 人基因组DNA定量试剂盒 |
| WE0258 | RIPA裂解液(强) |
| WE0185 | 血块基因组DNA提取试剂盒 |
| WE0124 | 高效多重PCR Mix |
| WE0331 | 抗GST标签琼脂糖介质 |
| WE0237 | T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK) |
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文献和实验如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
性,与目的模板竞争引物和酶等,可能导致PCR扩增效率的下降,影响定量结果的准确性;另外,并不是每个基因都能在相邻的且大小合适的外显子上找到合适的跨内含子引物,所以,很大部分实验需要在一个外显子上设计引物,这时就必须经过去除基因组DNA步骤,才能得到准确可靠的结果。 传统基因组DNA去除的方法采用对RNA进行处理,由于引入了蛋白(DNase I),后续需要进行氯仿抽提纯化,操作繁琐,耗时长,RNA的回收率低。TIANGEN公司的FastQuantcDNA第一链合成试剂盒(KR106
,导致更为特异的PCR扩增。 三、 试剂准备 1.RMA提取试剂 2.第一链cDNA合成试剂盒 3.dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 4.Taq DNA聚合酶 四、操作步骤 1. 总RNA的提取:见相关内容。 2. cDNA第一链的合成:目前试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售,其原理基本相同,但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScriptTM Preamplification
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR
性方面均要小。 3 . 特异性引物:最特异的引发方法是用含目标RNA 的互补序列的寡核苷酸作为引物,若PCR 反应用二种特异性引物,第一条链的合成可由与mRNA 3’ 端最靠近的配对引物起始。用此类引物仅产生所需要的cDNA ,导致更为特异的PCR 扩增。 二、 试剂准备 1 .RMA 提取试剂 2 .第一链cDNA 合成试剂盒 3 .dNTPmix :含dATP 、dCTP 、dGTP 、dTTP 各2mM 4 .Taq
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