一步法RT-PCR试剂盒厂商

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

一步法RT-PCR试剂盒厂商由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一步法RT-PCR试剂盒等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：一步法RT-PCR试剂盒厂商
品牌：百奥莱博
规格：100次
英文名：UltraRT One Step RT-PCR Kit
产地：国产|进口
  本试剂盒是专为一步法RT-PCR实验研制，逆转录和PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR扩增的反应缓冲液和实验中所必需的其它组分。UltraRT逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该逆转酶逆转录效率高，可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应。PCR反应使用的快速热启动DNA聚合酶具有扩增效率高、特异性强、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。使用本试剂盒扩增得到的目的产物3"端附有一个″A″碱基，可直接用于T/A克隆。

试剂盒组成：

 

组份	100次
UltraRT OneStep EnzymeMix	50μl
2×UltraRT OneStep Buffer	1.4ml
RNase-Free Water	1.5ml

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR 反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件来设计。

使用方法：
1、将RNA模板、引物、OneStep RT-PCR Buffer、UltraRT OneStep RT-PCR EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×UltraRT OneStep Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.4μM
UltraRT OneStep EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	1 pg–1μg
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、将热循环仪预热到45℃，将PCR管置于热循环仪中，进行RT-PCR反应。

反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	30 min
PCR预变性	95℃	2 min
变性	94℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20-30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间根据扩增的片段大小设定，本产品中包含的DNA Polymerase扩增效率为1 kb/30s。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

5、反应结束后取5μl反应产物，加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

除一步法RT-PCR试剂盒厂商外，我公司正在打折促销以下产品：
PP0501 新型快速蛋白染色试剂盒
磷酰二肽 6-Methylcoumarin 119942-99-3
ARB12196 大鼠半胱天冬蛋白酶3(CAspAse3/CPP32)Elisa方法检测 
弹性蛋白酶(猪胰) Epivir-HBV 39445-21-1
硫代乙醇酸* D-Tryptophanol 367-51-1
DL-苹果酸* CAPS Sodium salt 17482-42-7
J0304          兔抗马IgG(H+L)抗血清            
F030306 胶体金标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*GOLD
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ARB12398 大鼠视黄醇结合蛋白(RBP)Elisa定量检测 Rat retinol-binding protein,rbp ELISA KIT
3,3-二*基联*(代"*")*(代"胺")四盐*(代"酸")盐 Calcium 167684-17-5
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50-23-7 
一步法RT-PCR试剂盒厂商关键词：一步法RT-PCR试剂盒,WE0129,UltraRT One Step RT-PCR Kit


·T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
编号：WE0237
英文名称：T4 Polynucleotide Kinase
规格：500U|2500U
  T4多聚核苷酸激酶，是由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体，可以催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷间进行转移和交换，同时还具有3’磷酸酶活性，能将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。该T4多聚核苷酸激酶可用于寡核苷酸、DNA或RNA的5’末端标记或磷酸化；催化3’磷酸化的单核苷酸5’磷酸化以及去除3’端磷酸基团等。本品于75℃加热10分钟可使其失活，加入EDTA也可使其失活，金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50 mM的KCl和NaCl均可显著抑制其活性。

·FITC标记驴抗兔IgG(H+L)
编号：WE0365
英文名称：Donkey Anti-Rabbit IgG,FITC Conjugated
规格：100μl
本产品为FITC标记的经亲和纯化的驴抗体，特异识别兔IgG，检测灵敏度高，本底低，常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。FITC即硫*酸荧光素，为一种常用的荧光染料，常用于免疫荧光和流式细胞检测等多标记检测。

免疫原：兔IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：FITC，Amax=492; Emax=520
应用范围：对于大多数实验(1：50-200)

·SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)
编号：WE0289
英文名称：SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing，5×)
规格：5×2ml
  SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)是以*酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于非还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本品不含还原剂如巯基乙醇或DTT。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。进行常规电泳。

储存条件：-20℃


一步法RT-PCR试剂盒厂商关键词：一步法RT-PCR试剂盒,WE0129,UltraRT One Step RT-PCR Kit


·鼠尾基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0186
英文名称：Mouse&Rat Tail Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行，纯化过程无需*酚或*仿抽提，可获得最大为50 kb的DNA片段，同时对100 bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液，有效裂解鼠尾样本，优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上，而其他污染物可流过膜；PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTT	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇

产品特点
1、专用于从大鼠或小鼠的鼠尾中分离纯化高纯度总DNA。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

操作步骤：
1、取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4-0.6 cm的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管(自备)中。加入180μl Buffer GTT，振荡混匀。
注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围。
2、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋振荡，彻底混匀。
3、置于56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化6-8小时，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。
注意：1)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入20μl 蛋白酶K 消化，不会影响后续操作。
2)如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管(自备)中。
5、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡，充分混匀。加入200μl无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
3)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
6、将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μlBuffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

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