北京现货pUC18/MspI(34～501bp)打折促销

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货pUC18/MspI(34～501bp)打折促销在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京现货pUC18/MspI(34～501bp)打折促销
编号：RFT025
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：20T(10μg/40μl)|50T(25μg/100μl)
本产品是由pUC18质粒经MspI完全酶切得到的，包括501，489，404，353，242，190，147，110，89，67，34bp DNA片段，适用于琼脂糖或聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳中DNA条带的分析。本产品为浓缩型，配有6×DNA loading buffer，使用时按照比例配制即可。



使用方法：
1. 取2μl(0.5μg)DNA加1μl 6×DNA loading buffer，3μl去离子水混匀。取2-5μl混匀品加入到琼脂糖凝胶或聚丙*(代"烯")酰胺凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl，如果加样孔宽于5mm，可以适当增加上样量)就行电泳。
注：不建议用于变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳。
2. 建议电泳条件为2.5-3.0％的琼脂糖凝胶，电压4-10 v/cm，凝胶长度7cm；或5.0-8.0％的聚丙*(代"烯")酰胺凝胶，电压10 v/cm，凝胶长度15cm。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注：如果对聚丙*(代"烯")酰胺凝胶进行银染，由于灵敏度较高，请适当降低Marker的上样量。

注意事项：
1. 凝胶介质的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖和丙稀酰胺。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

关于北京现货pUC18/MspI(34～501bp)打折促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·随机六聚体引物
编号：RFT106
英文名称：Random Hexamer Primer
规格：100μl
pd(N)6随机六聚体引物含有6个碱基的随机序列引物。5’末端带有磷酸基，3’末端为羟基末端。5’-P-d(NNNNNN)-3’ N = G, A, T or C。随机引物适用于长的或具有发夹结构的RNA。它的特异性较低，常用于获取5’末端序列或从带有二级结构区域的模板获取cDNA。为了能得到较长的cDNA，需要经过摸索确定样品中引物与RNA的比例。该产品是含有6个碱基的随机引物，已经配成20倍的即用型溶液，如20μl反应体系中使用1μl。本品浓度为0.2μg/μl(100μM)

适用范围：
1、第一链cDNA合成。
2、用随机引物与[α-32P]dCTP组合，可以代替切口平移法进行DNA的标记，准备成的探针可以直接应用于DNA杂交。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

·高效高保真DNA聚合酶
编号：RFT103
英文名称：Taq plus DNA Polymerase
规格：500U(100μl)|5×500U(5×100μl)
Taq plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成，具有扩增效率高，错配率低的特点。与Taq DNA聚合酶相比，Taq plus DNA聚合酶具有扩增长度长，保真性好的优点；与pfu DNA聚合酶相比，具有扩增速度快，反应效率高的优点。此酶具有比Taq DNA聚合酶约3倍的PCR可信度。该酶的大多数PCR产物3’端带碱基A，可以通过TA克隆法进行克隆。适用于要求保真性和高效率的PCR反应，大多数情况下可以替代Taq DNA 聚合酶。

产品组成：
Taq plus DNA Polymerase(5U/μl)——————————100μl
10×Taq plus PCR buffer(含Mg2＋)——————————1ml

活性定义：1单位(U) Taq plus DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

成分	体积	终浓度
Template	0.1-1μg	as you wish
Primer 1(10μM)	1μl	200nM
Primer 2(10μM)	1μl	200nM
10×Taq plus PCR buffer	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	1μl	200μM each
Taq plus(5 U/μl)	0.5-1μl	2.5-5U
ddH2O	up to 50μl	-

2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
最后延伸	72℃	5 min	1

*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

常见问题分析：
1、Taq plus DNA polymerase能扩增多长片段？
对简单模板(如λ噬菌体做模板)，可以扩增 kb片段；对复杂模板(如基因组DNA)，可以扩增 kb片段。
2、Taq plus DNA polymerase保真性怎样？
Taq plus含有3’-5’校对活性的聚合酶，有校对功能。保真性为普通Taq酶的3倍。
3、使用Taq plus DNA polymerase的扩增产物是否可以进行TA克隆？
由于使用Taq plus得到的PCR产物大多数带有A，可以进行TA克隆。
4、Taq plus DNA polymerase可以扩增高GC含量片段吗？
Taq plus可以扩增高GC含量片段，建议使用Taq plus配合2×GC buffer使用，而不建议使用10×Taq plus PCR buffer。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·超低分子量蛋白Marker IV(3.3～45kD)
编号：RFT047
规格：10T(50μl)
本产品包含2种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-45kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。



使用说明：
第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品每次使用前，要95℃加热处理5分钟。

一. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置5-10分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 (一块0.75mm mini胶用量)

	分离胶	浓缩胶
	18％T, 5%C /6.0ml	5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA(19:1)	2.7 ml	/
40% PAA (29:1)	/	0.25 ml
4×多肽电泳凝胶缓冲液	1.5 ml	0.5 ml
乙二醇(电泳级)	1.8 ml	/
ddH2O	/	1.25 ml
10％APS	50-65μl	20μl
TEMED	6μl	2μl

注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫*(代"酸")铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置20-30分钟装待凝胶聚合

二. 电泳：
1. 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，95℃加热处理5分钟，充分混匀后备用。
2. 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品(样品已经过2×Tricine上样缓冲液处理)加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。
注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
表二 多肽电泳条件

恒电压	150 V
起始电流	45-55 mA
结束电流	10-15 mA
电泳时间	2-3小时

三. 染色
根据常规实验步骤进行染色和观察。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


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