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- 文献和实验
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- 保存条件:
常温运输
- 保质期:
一年
- 英文名:
DNAgreen(UV)
- 库存:
832
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博供应的北京绿如蓝核酸染料(UV)价格用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多绿如蓝核酸染料(UV)等核酸电泳和回收产品请联系我司咨询订购。
名称:北京绿如蓝核酸染料(UV)价格
规格:1.5mL
编号:BTN70303
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:DNAgreen(UV)
目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I(属于花*类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性往往不尽人意;此外,SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位,很容易使DNA 条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB 稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料
产品特点:
1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。
3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4. 无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源,可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9. DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作时最好还是戴上塑料手套。
使用方法之一:电泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA完全一样)。
本方法是将DNAGREEN 直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。
1. 将DNAGREEN 直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每100mL凝胶加3-10μl DNAGREEN,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I,否则会相互干扰)。在100mL 琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10μl,否则背景将很强。注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在第一次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
2. 将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意:一定要使用不含SDS等去污剂的上样液,否则SDS 会跟染料结合,极大地降低灵敏度。
3.上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。如果使用百奥莱博五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2,需要较高电压,详见该产品说明书。
4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意:不要使用波长为260nm或360nm的UV,否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
注:显色结果:在紫外下,DNA浓度非常高的时候是白色,浓度低的时候是绿色的,单链核酸有时是红色的。
5. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。
6.后续 Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。
使用方法之二:电泳后染色DNA
本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用去离子水将DNAGREEN 稀释500倍后(100mL 水需要加0.2mL DNAGREEN),将凝胶放入,室温下摇晃染色30分钟(对琼脂糖凝胶)或15分钟(对PAGE)。
3. 用水脱色 10-30分钟,具体时间需根据背景强弱决定,其余同方法一。
注意:电泳后染色液可以反复使用次数。
疑难解答:
Q:本产品可否用于RNA染色?
A:可以,不论RNA是在甲醛变性胶中电泳,还是在普通的SuperBuffer-2、TBE或TAE胶中电泳,RNA染色后在300nm下都跟DNA一样呈绿色。
Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?
A:不行,本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。
Q:为何前端(靠近正极)的DNA 条带很淡或根本看不见?
A:跟EB一样,电泳时DNAGREEN 朝负极方向移动,当前端的DNA(最小片段)进入没有DNAGREEN的区域时,已经结合的染料分子会逐渐从DNA分子上脱落,所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色;之二是在每100mL电泳缓冲液中补加3-5μL染料。
Q:本产品在哪种缓冲液中效果最好?
A:DNAGREEN染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同,从弱到强的顺序是:
SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中,可以适当降低染料的用量,比如100mL胶中加3-5μl。最佳浓度需要稍做摸索。
Q: 为何电泳后前面部分(靠近正极)的胶呈白色,后面的胶呈黑色?
A: DNAGREEN染料带正电,电泳时往上走,胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。
本产品在TAE中背景最强,可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。
Q:用SYBR染色的DNA在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象?
A:SYBR染料一般与DNA的小沟结合,但在常规电泳条件下该结合并不牢固,染料分子可以在标记的和未标记的DNA分子之间转移,使DNA分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时),发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA 结合牢固,则无此现象。
Q:核酸染料是否都有毒性?
A:核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。
一是染料的膜通透性,EB 被归类为强诱变剂是由于其分子量较小,容易进入细胞内。而EB 二聚体Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB 强上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透过细胞膜,所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解,不能使用水溶液做溶剂)中,所以如果溅到皮肤表面,更容易进入皮肤。
二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解,一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长,增加了毒性;而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式与DNA 结合)由于不稳定,比较容易自然降解,所以毒性自然较低。
三是降解产物是否有毒性,比如用很多方法(如强碱法)降解EB 得到的产物有的比EB 毒性更大,而有的染料降解产物毒性却低很多,甚至无毒。
四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA 结合,很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中,因为染色体中的DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。
五是细胞修复突变的能力,正常人体都有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV 诱导的DNA突变。总之,一种DNA染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。
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·Zenker固定液
编号:BTN131223
英文名称:Zenker Fixative Solution
规格:250mL
Zenker固定液是常用的混合型固定液,是细胞学及病理学常用的固定剂之一,由重铬酸*、生汞、乙酸和水混合而成。用该固定液固定的组织,细胞核及细胞浆染色十分清晰,特别是要显示免疫球蛋白、病毒包涵体(如Negri小体)、骨骼肌的横纹等组织时,应用本液可获得良好的结果。
产品特点:
1.Zenker固定液对细胞核固定效果较好,较适合于造血和网状内皮组织等样品的固定。
2.Zenker固定液不能用于保存细胞颗粒,红细胞及含铁血黄素。对含血量较多的组织标本不建议使用Zenker液固定。
3.常作为三色染色的组织固定剂,在三色染色中还作为媒染剂使用。
4.固定时间一般需要12-24小时。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 250ml |
| 溶液B | 15ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
1.配制适量体积的Zenker 固定液,按照19:1的比例将溶液A和溶液B混合,搅拌均匀,所得溶液即为Zenker 固定液工作液。注:Zenker 固定液工作液建议即配即用。
2.标本修块,置入Zenker 固定液工作液内固定12~24h(根据样品材料、大小不同,固定时间可能会有较大差异)。
3.固定后,用流水冲洗12h,或者亚硫*(代"酸")*溶液冲洗,也可用1%的*水溶液洗涤。在70%酒精脱水时加入碘(配成0.5%碘酒)脱汞。
4.常规方法脱水、透明。
注意事项:
1.由于Zenker 固定液中含*化汞,固定后必须脱汞。
2.固定后,组织必须用流水冲洗去除重络酸*否则乙醇脱水会引起络显色。
3.本固定液不能用金属容器盛放,组织固定后,也不能用金属镊夹取。
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