细菌RNA提取试剂盒现货价格

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百奥莱博专业生产供应细菌RNA提取试剂盒现货价格，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：细菌RNA提取试剂盒现货价格
编号：BTN51102
规格：100次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：Bacterial RNA extraction kit
本试剂盒是在动物RNA提取试剂盒基础上根据细菌提取的具体情况改良而得。它基于异硫*酸胍/酚/*仿提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各种常见的革氏阴性细菌。如果需要提革氏阳性细菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以选择真菌RNA提取试剂盒。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，只要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 所得 RNA 质量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 灵敏度高，可以从一个菌落中提取到普通电泳能够检测到的总 RNA。
4. 性价比高于进口同类产品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
细菌RNA提取试剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌(注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜细菌)，吸尽液体培养基，加入1mL细菌RNA提取试剂盒并用枪充分吹打，确保细菌全部裂解，没有块状物。
 如果使用菌落，则用接种环小心将其转移到装有1mL细菌RNA提取试剂盒的1.5 m塑料离心管中，用移液枪吹打均匀。在细菌数较少时，建议使 用助沉剂 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL *仿，在振荡器上充分振荡混均 30秒(必须将管底的液体振荡起来，否则不能有效将DNA 打断和去除蛋白质)。
3. 12000～15000g室温离心3分钟。上清液无色，下层液呈篮色，中间为蛋白质。小心将上清液转移到另一干净 1.5ml塑料离心管中，上清液体积约为0.6mL。为避免触及中间层的DNA和蛋白质，建议分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。当细菌数量较少时，中间层十分松散，上清时很容易吸到下层有机相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
5. 12000～15000室温离心 3-10分钟，RNA 将在管底侧面形成沉淀。
6.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
7.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
8. 12000～15000g室温离心 1分钟。
9.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
10. 重复第 8 到第 10 步一次。
11. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液(约50μl)。
12. 短暂放 1-2分钟后加入适量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
13. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
 由于细菌细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由23S(约3700nt)，16S(约1700nt)和5S(约100nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合 EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以23S rRNA条带的荧光强度一般比16S rRNA条带的荧光强度强2倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA产量产率测定：
 将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量和产率。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液 pH相关，而 DEPC 水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液 pH降低进而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 纯度测定：
 无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，最好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

除细菌RNA提取试剂盒现货价格外，我公司正在打折促销以下产品：

·2M咪唑溶液
编号：BTN131222
英文名称：Imidozol Solution
规格：250mL
本产品是配制好的2M的咪唑溶液，可以用于His标签蛋白纯化时洗脱His标签蛋白。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·5M异硫*酸胍溶液
编号：BTN100902
英文名称：Imidozol Solution
规格：250mL
本产品是配制好的2M的咪唑溶液，可以用于His标签蛋白纯化时洗脱His标签蛋白。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·链霉亲和素磁珠
编号：BTN130521
英文名称：Magnetic beads binding with streptavidin
规格：2mL
本产品是由磁性纳米颗粒与高纯度的链霉亲和素共价偶联而成。这种微球能用于捕获生物素标记的底物，如抗原、抗体和核酸等。链霉亲和素(streptavidin)与生物素(biotin)的结合是最著名的非共价生物交互作用之一，因此，这也是亲和层析法所使用的一种强大工具。生物分子可以与生物素轻松融合，而层析基质上固定的链霉亲和素配体可以与之结合，而且这种链霉亲和素-生物素相互作用具有较低的非特异亲和性，捕获所需的底物能够直接应用于后续实验。本产品可广泛应用于免疫学检测、核酸纯化、核酸固相杂交检测、细胞分选等分子生物学实验。

产品特点：
1. 对于生物素化样品的捕获、漂洗及检测等流程操作更加简便。
2. 体系经过优化，更易于大规模、多样品、自动化操作。
3. 磁珠浓度：1%磁珠含量；
 固相载体：超顺磁性硅基磁珠；
 磁珠粒径：1μm；
 pH耐受范围：2-9。
4. 载样量(每毫克磁珠)：﹥3000pmol游离生物素；﹥450pmol生物素标记的单链寡核苷酸；﹥20μg生物素化IgG。
5.缓冲液：10mM PBS，0.1% BSA，0.05% sodiu*(代"m") azide，0.1% Tween20。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 取适量磁珠(推荐每次取30μL-50μL 磁珠混悬液，用户可根据样品种类及需求调整使用量)于干净离心管中，通过磁力架磁分离后弃上清。
 注：磁珠使用前请使用上样缓冲液淋洗磁珠3-5次，以保证磁珠的使用效果。
2. 加入待反应样品，室温振荡反应10-30分钟后(反应时间根据生物素化分子的大小及空间结构的复杂性可适当延长)，置于磁力架上进行磁分离，弃上清，并用上样缓冲液重复淋洗3次。
3. 链霉亲和素和生物素的结合非常迅速，且结合后不受pH，温度，有机溶剂和其他变性剂的影响。下表列出了常用链霉亲和素和生物素的解离办法及效率(基于游离生物素，与偶联复合物的生物素数据有明显差异)，用户也可根据自己样品的需求自行设定洗脱方式。
4. 洗脱后的样品客户可根据需求采用适当方法检测。
洗脱条件参照表：

洗脱温度和时间	洗脱溶液	洗脱效率
90℃ for 10min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.8%
90℃ for 5min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.4%
90℃ for 2min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.8%
65℃ for 5min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.4%
65℃ for 2min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	97.9%
37℃ for 10min	10mM EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	41.9%
90℃ for 10min	H2O	7.3%
90℃ for 10min	10mM EDTA pH8.2	52.0%
90℃ for 10min	95%甲酰胺	35.9%
90℃ for 10min	30mM NaOAc pH9 and 95%甲酰胺	95.5%
90℃ for 10min	80mM NaOAc pH9 and 95%甲酰胺	97.3%
90℃ for 10min	140mM NaOAc pH9 and 95%甲酰胺	95.4%

使用举例：
利用链霉亲和素磁珠从总RNA中提取mRNA的方法
1. 取0.1-1mg的总RNA样品加入到无菌、无RNase的1.5ml离心管中，加入无菌去离子水至终体积为500μl(注：总RNA 量可低至50μg，但是在该条件下所提取得到的mRNA 常规电泳检测不到，需要采用RT-PCR进行微量检测)。
2. 将上步样品管于65℃温浴10min。
3. 加入3μl 生物素化的Oligo(dT)和13μl的20×SSC溶液到总RNA样品中，温和混匀，室温放置至完全冷却，这一步需要约10min左右。
4.预处理链霉亲和素磁珠：将链霉亲和素磁珠充分混匀后，取适量磁珠于1.5mL无菌、无RNase的离心管内，放在磁力架上，待磁液分离后，移除上清。加1mL 0.5× SSC 洗涤磁珠，放在磁力架上磁液分离，移除上清，重复两次。加100μl 0.5× SSC重悬链霉亲和素磁珠。
5. 将第3 步制备的总RNA 混合溶液加入到上步制备的已经洗涤好且重悬的链霉亲和素磁珠溶液中。
6.室温放置10min，期间每隔1-2min 轻柔混匀以防磁珠出现沉降现象。采用磁力架分离磁珠，小心移除上清，过程中不要触碰到磁珠，该步上清在确定mRNA已经结合并洗脱后再弃掉。
7. 加300μl 0.1×SSC溶液温和吹打或是轻弹洗涤磁珠，然后置于磁力架上分离磁珠，磁液分离后小心移除上清，重复三次，最后一步洗涤后尽可能移除所有上清液。
8. 加入100μl 无RNase 去离子水(洗脱液)，温和吹打或轻弹离心管使磁珠和洗脱液充分混匀。65℃水浴2分钟。
9. 置于磁力架上分离磁珠，将上清转移到一个新的无RNase的离心管内，不要触碰到磁珠(注：如果在转移过程中将磁珠悬起，可将样品管置回磁力架上重新吸取上清)。
10. 回收洗脱液中的mRNA。

链霉亲和素磁珠提取生物素化IgG
1.预处理链霉亲和素磁珠：链霉亲和素磁珠的保存需要加入BSA以保持其活性，故在使用链霉亲和素磁珠之前要彻底除去磁珠储存缓冲液中的BSA、叠氮*和Tween20。使用前需用PBS缓冲液于30分钟之内清洗3次以使磁珠达到最佳使用效果。
 注：在使用前必须彻底重悬链霉亲和素磁珠以保证最佳使用效果和重复性。如果磁珠出现结块现象请勿再继续使用。
2. 将生物素化的IgG 溶解于PBS，IgG浓度大于2mg/mL 较利于筛选。
3. 取100μl预处理过的链霉亲和素磁珠充分震荡混匀，置于磁力架上分离磁珠，去除上清，该过程尽量不要触碰到磁珠团。
4. 取500μl PBS 重悬磁珠，放于磁力架上，磁液分离后，移除上清，重复洗两次。PBS 重悬磁珠，使磁珠恢复到最初的浓度10mg/mL。
5. 将第2 步制备的IgG 加到磁珠管内，室温震荡反应30min。保持磁珠处于悬浮状态，以达到好的结合效率。反应结束后，置于磁力架上，磁液分离后，用移液器小心将上清移至一干净离心管内。注：该步上清可以用来检测未结合到链霉亲和素磁珠上的IgG浓度。
6. 加入1mL PBS溶液重悬淋洗磁珠，置于磁力架上，磁液分离后，移除上清，重复淋洗两次。
7. 选择合适的洗脱方式洗脱IgG。


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3,5-二*吡*(代"啶") OMEGA 71902-33-5
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ARB11401 人神经保护因子(CVNPF)酶联免疫定量检测 Human cobra venom neuronal protective factor,cvnpf ELISA KIT
胞苷 Murexide 65-46-3
没食子酸月桂酯 5-BrdC 1166-52-5
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PY02-351  亚硫*(代"酸")铁琼脂  250克  
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D-焦谷*酸 Ethyl caprate 4042-36-8
N-(2-羟yi基)哌*(代"嗪")-N"-4-丁磺酸 Brij-35 161308-36-7
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偶氮胂Ⅲ CABN 1668-00-4
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D-*甘*酸 RNA 875-74-1
14930-96-2 细胞松弛素B Cytochalasin B
PY04-013  肝提取液  8ml×10支  每瓶添加于100mlBBL琼脂培养基中，用于食品微生物中双歧杆菌的平板计数及菌种鉴定
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F030505 FITC标记兔抗牛血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-BSA*FITC
ARB11385 人活化素A(ACV-A)酶标法分析 Human activin a,acv-a ELISA KIT

我公司生产供应销*(代"售")的RNA纯化正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购细菌RNA提取试剂盒现货价格。