Tris盐酸溶液(1M,pH7.0)(不含RNase)特价优

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百奥莱博专业生产销*(代"售")Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.0)(不含RNase)特价优惠，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.0)(不含RNase)特价优惠
品牌：百奥莱博
规格：250mL
编号：BTN60902
英文名：RNase-Free Tris-HCl Solution

我公司的Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.0)(不含RNase)特价优惠，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·藻类RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN120503
英文名称：Algae RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于各种藻类样品RNA提取的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。
3. RNA产量高，一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
溶液D	30ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将1-5mL液体藻类培养物在1.5mL塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.5mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入0.5mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入0.2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的5-10mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约1mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为1mL，则加入3mL溶液C和1mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移0.7mL混合液到离心吸附柱中，室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入0.7mL混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将0.7mL通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA洗脱液。具体加多少根据RNA浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
 注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
 将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE(pH7.5-8.2之间)中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD比值没有意义。


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·柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(测序级)
编号：BTN120501
英文名称：Animal mitochondrial DNA column extraction kit(Sequencing Grade)
规格：15次
本试剂盒就是基于先纯化动物细胞线粒体、再从中柱式法纯化其DNA的两步法试剂盒。

试剂盒特点：
1. 即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2. 两步法，先纯化线粒体，再柱式法纯化其中的DNA，有粗提(mtDNA纯化前不用DNase处理线粒体)和精提(mtDNA纯化前用DNase处理线粒体)两套操作方案，适合于各种要求不同的后续实验。
3. 本产品一次可以处理约107×108个培养细胞，10mg培养细胞(相当于5瓶150 mm培养细胞)可以纯化到到0.2-0.5mg线粒体。
4. 本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不建议用于动物实体组织。
5. 提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

成分	规格	备注
溶液A	225ml	配制匀浆液
蔗糖	25.4g	配制匀浆液
詹纳斯染色液	1ml	染色线粒体
溶液B	0.5ml	配制核酸酶反应液
DNase A干粉	1mg	酶切细胞核DNA
Benzonase(1U/μL)	100μl	酶切细胞核DNA
溶液C	10ml	纯化mtDNA
溶液D	5ml	纯化mtDNA
溶液E	20ml	纯化mtDNA
离心吸附柱	15套	纯化mtDNA
通用洗柱液	15ml	纯化mtDNA
DNA洗脱液	10ml	纯化mtDNA
人TPMT VNTR	上游引物	GCT CCG CCC TGC CCA TTT
	下游引物	GCC TCC GCC ACC AAT GAC
人线粒体HV2区	上游引物	GGT CTA TCA CCC TAT TAA CCA C
	下游引物	CTG TTA AAA GTG CAT ACC GCC A
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一：线粒体粗提
1. 称25.4g蔗糖到225mL溶液A中，盖上盖子后充分摇晃3～5分钟溶解即得250mL溶液A工作液，放冰上预冷待用。未用完的溶液A工作液需要-20℃保存，否则会长菌。
2. 如果是单层细胞，先用20mL PBS缓冲液洗涤107×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在20mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集107×108个细胞，再用20mL PBS缓冲液洗涤2次，最后将细胞重悬在20mL PBS缓冲液中。
3. 用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
4. 加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的溶液A工作液，轻柔重悬细胞。
5. 如果是成纤维细胞，由于其难于裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是，则直接进入下步操作。
6. 将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，最好是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20-50%以下为佳。
7. 用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
8.转移上清液到离心管中，冰上放置待用。如有必要，可在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴一滴上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液染色20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
9. 用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
10. 用5mL溶液A工作液洗涤2次得线粒体粗提液(即重悬后，4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清)。
11. 如果后续实验是提取mtDNA用于PCR或Southern杂交，则直接进入第3部分mtDNA提取，也可以放-80℃长期保存待用。
12. 如果后续实验是提取mtDNA用于高通量测序，则必须彻底降解掉其中的细胞核DNA污染。匀浆过程中一个破裂的细胞核释放出的DNA相当于上百万个线粒体的DNA量之合，所以无论如何小心，粗提线粒体中必有大量的细胞核DNA污染，如果不将其清除，高通量测得的序列将绝大部分来于核DNA而非mtDNA。

二：线粒体粗提液中细胞核DNA的去除及鉴定
13. 将线粒体重悬于0.3mL溶液A工作液中，取10μl作为未处理对照。
14. 加入6μl Benzonase(1U/μL)溶液和30μl DNase A溶液(配法：将0.5mL溶液B加到装有1mg DNase A干粉的离心管中得到2mg/mL溶液，未用完的部分需要分装后放-20℃保存)。
15. 37℃保温一段时间酶切细胞核DNA。注意：最好先预实验，每隔一段时间取10μl样品，灭活其中的DNase后作为模板用PCR扩增1-4个自选的VNTR位点和1-2个mtDNA基因(如vis或COII基因)，检测不到VNTR基因而能检测到mtDNA基因的处理时间为最佳。可从本公司另购细胞核基因和线粒体基因专一性引物。
16. 加入10μl自备的0.5M EDTA溶液(pH8.0)以终止酶反应。显微镜下检查线粒体完整性(见上节第8步)。
17. 用固定角度转子离心机4℃10000 g离心10分钟，弃上清。
18. 用1mL的溶液A工作液洗涤沉淀(即重悬后，4℃ 10000 g离心10分钟，弃上清。此为一次洗涤。)2次得到线粒体沉淀。

三：线粒体DNA提取
19.在不超过100μl的线粒体沉淀中加入600μl预热的溶液C到沉淀中，充分吹打均匀。
20. 再加入150μl(可称150-160mg)预热的溶液D到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。
21. 65℃放置3～5分钟。
22. 加入200μl自备*仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。
23. 12000～15000g室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中，避免触及中间的白膜。
24. 加入1.5倍体积的溶液E，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
25. 12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。
26. 通用洗柱液洗涤2次(将0.5mL加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液，此为洗涤一次，再重复一次)。
27. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。
28. 加30-50μl DNA 洗脱液，室温放置3～5分钟。
29. 12000rpm室温离心1分钟即得纯化的mtDNA溶液。


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  Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.0)(不含RNase)如何储存？
化学试剂的变质，大多数情况是因为受外界条件的影响，如空气中的氧气、二氧化碳、水蒸气、空气中的酸碱性物质以及环境 温度、光照等，都可使化学试剂发生氧化、还原、潮解、风化、析晶、稀释、锈蚀、分解、挥发、升华、聚合、发霉、变色以及燃爆等变化。经常检查储存中的化学 试剂的存放状况发现实际起过的储存期或变质应及时报告，并按规定妥善处理 ( 降级使用或报废) 和销帐。在正常储存条件下，一般化学试剂贮有不宜超过2年，基准试剂不超1年。为了避免环境和其他因素的干扰，所有化学试剂一经取出不得放回贮有容器: 属于必须回收的试剂或指定、退库、的试剂，必须另设专用容器回收或贮存，具有吸潮性或易氧化，易变质的化学试试剂必须密封保存，避免吸湿解，氧化或变质。 定期盘点，核对出现差错应及时检查原因，并报主管领导或部门处理。



·RecA蛋白
编号：BTN130661
英文名称：RecA Protein
规格：200μg
RecA在基因重组中是不可缺少的，它参与DNA 修复和紫外线诱导的突变。RecA促进lexA抑制子、umuD蛋白和lambda抑制子的自裂解。切割LexA能使20多种基因不再受到抑制。体外研究证明，在ATP参与下，RecA促进单链DNA片断与同源双链DNA片断发生链置换。

产品特点：
1．电镜分析DNA结构；
2．D环突变；
3．用RecA蛋白包被的探针来进行文库筛选；
4．切割任意一个预先设计的位点；
5．RecA导全长cDNA克隆的亲合捕获。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

·新生霉素溶液
编号：BTN120695
英文名称：Novobiocin Sodium Solution
规格：5mL
本产品是浓度为50mg/mL的新生霉素溶液。新生霉素(Albamycin、Cardelmycin、Cathomycin、Cathomycine)，分子式为：C31H35N2NaO11，分子量是：634.61，CAS号：1476-53-5，抗菌谱和青霉素相似，主要用于耐药性金葡菌引起的感染，如肺炎、败血症等，对严重感染疗效较差。通过抑制细胞增殖、抑制DNA合成、影响拓扑异构酶ⅡDNA交联复合物的形成及延误细胞周期进展发挥抗癌作用。

结构式：


储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。



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