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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输和4 ℃干燥避光保存
- 保质期:
长期
- 英文名:
Cell Counting Kit-8
- 库存:
759
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒优惠,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒
英文名:Cell Counting Kit-8
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:BTN121205
本CCK-8试剂盒是基于WTS-8的第二代细胞增殖及毒性检测产品,主要成分为水溶性四唑盐WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝*基)-3-(4-硝*基)-5-(2,4-二磺基*)-2H-四唑单*盐,WST-8为一种MTT类似物,在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成橙黄色水溶性的甲臜(formazan)。生成的甲臜量与活细胞数量成线性相关。
产品特点:
1.溶液稳定,对细胞无毒性,可直接同步加入到细胞样品中长时间孵育,可以多次测定选取最佳测定时间。
2.灵敏度高,实验的灵敏度比其它如MTT,XTT或MTS高,操作简便、快捷,实验结果重复性好。
3.水溶性,免去后续的溶解步骤。
4.不需要换液,尤其适合于悬浮细胞。
5.安全无毒,不会对操作人员身体造成危害。
6.可以广泛应用于生物活性因子的活性检测、药物的筛选、细胞增殖检测、细胞毒性。
储存条件:常温运输和4 ℃干燥避光保存,有效期一年。
使用方法:
一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时测定细胞具体数量时)
1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2.按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。
3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加 CCK 试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间)。
二、细胞活性检测
1.在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板在培养箱中预培养24小时(37℃,5% CO2)。
2.每孔加入10μL的CCK溶液。
3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5.如果暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl溶液或者 1%w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增殖-毒性检测
1.在96孔板中配置 100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃,5%CO2)。
2.向培养板中加入10μL不同浓度的待测物质。
3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。
4.向每孔加入10μL CCK溶液。
5.将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7.如果暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl溶液或者1%w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
注意事项:
1.如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。如果药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
2.用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡,否则会干扰测定。
3.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
4.有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加,容易产生气泡,会干扰OD 值读数。
5.白细胞可能需要培养较长时间。
6.当使用标准 96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。
7.如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
8.培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
结果分析:
细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100
A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
关键词:CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒,BTN121205,Cell Counting Kit-8
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文献和实验一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
在细胞培养实验过程中,大家是不是总会好奇别人家的实验总是做的又快又好,而自己做的实验又慢又难得做出自己满意的结果,搞得一天到晚也挺忙的,心想:我也很努力很认真啊,为啥效率总提不起来呢?其实,有时候并不是自己不努力,只是没有找对方法。做实验可不能光是埋头苦干,还要学会运用合适的检测试剂盒,这样就能事半功倍。如果你还在用 MTT,那就真的 OUT 了,MTT 花 4 小时才能得到的结果用 CCK-8 只需 1 小时,CCK-8 可用于细胞增殖和毒性分析,同 MTT 法相比,CCK-8 即开即用
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 Ø WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。 Ø WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显
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