结肠癌cDNA组织芯片60点，cDNA-HColA060CS

做PCR达人，从引物设计开始

小。特殊情况下可以进一步延长到50-60 bp，但长引物的合成出错率高，价格贵，而且难以合成，因此较为少见。另外，上下游引物的长度最好基本相等，最多相差不超过3 bp。 02 引物GC含量：40-60% A、T、G和C四种碱基要在引物中均匀分配，如果引物存在严重的GC倾向或AT倾向则可以在引物5’端加适量的A、T或G、C尾巴。 03 引物的退火温度：55～75 ℃ 退火温度需要比解链温度（Tm）低5 ℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，反之亦然。一对引物

【交流】MICROARRAY入门教材

生物体，如人和小鼠，目前常用来自cDNA文库的带有特异性序列的克隆，以及ESTs来鉴定不同mRNA的转录物[23]，而与这些转录物相应的单个cDNA克隆就可以作为靶DNA用于点芯片。我们实验室最近已用这种方法制作了约10000个基因的人类基因芯片，点在芯片上的DNA序列是用PCR扩增的cDNA克隆（I.M.A.G.E. cDNA文库）[24]的插入片段。对于那些没启动基因组测序计划的或还没得到序列的有机体，来自cDNA文库的克隆（相当正规的实验室能最大限度地减少重复）也能作为点片的靶DNA。在预先

基因芯片技术知识概要

较简单，只需将预先制备好的寡核苷酸或cDNA等样品通过自动点样装置点于经特殊处理的玻璃片或其它材料上即可。 1、原位光蚀刻合成　寡聚核苷酸原位光蚀刻合成技术是由Affymetrix公司开发的，采用的技术原理是在合成碱基单体的5'羟基末端连上一个光敏保护基。合成的第一步是利用光照射使羟基端脱保护，然后一个5'端保护的核苷酸单体连接上去，这个过程反复进行直至合成完毕。使用多种掩盖物能以更少的合成步骤生产出高密度的阵列，在合成循环中探针数目呈指数增长。某一含n个核苷酸的寡聚核苷酸，通过4×n个化学