胃癌cDNA组织芯片30点，cDNA-HStmA030CS0

做PCR达人，从引物设计开始

图 引物设计总体上包含三个程序：模板的获得、同源性分析以及引物筛选。模板的获得有多种来源，根据实验目的来定，这里不多作讨论。同源性分析的目的是看引物与模板有没有非特异性结合位点，特别要避免非特异性结合位点的3’末端完全配对。为最大程度确保获得较好的PCR结果，引物筛选需要满足以下几项基本原则：   01 引物长度：18-30 nt  大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸，引物长度的上限并不是很重要，主要与反应效率有关。引物越长，退火结合到靶DNA上形成稳定双链模板的速率越

基因表达之RT-PCR之我见

和sb GAPDH超过28－30循环的话，结果是不可信的，实际上即使超过25循环也是值得商榷的，肯定再RNA或者cDNA的步骤有问题，此时因该增加模板量，而不是增加循环数，即使目的基因要用30以上也要考虑一下。对于想脾脏这样的组织，actin甚至可能要低于20循环，实际上在后文谈到的凝胶成像仪的检测范围之内，应该循环数越少越好。还是那句话，并不是在指数期就可以的。 提示：另外，不是很亮（跑电泳时）并不代表没有到平台期，再看看我们的做的定量PCR的图就明白了，有些基因的平台期是达不到很高的（这不

细胞组分的分析方法――核酸序列的原位杂交

015mol/L柠檬酸钠，pH7．4，等于1×)中浸泡过夜。 (2)捞出硝酸纤维素膜，空气干燥。 (3)将标记后的探针进行适当稀释，95℃水浴加热2-5min，使DNA变性。 (4)将变性后的DNA探针马上冰浴10min。 (5)将探针点在晾干的硝酸纤维素膜上，每个斑点点4μl。 (6)晾干后，将点样的硝酸纤维素膜夹在滤纸中间，80℃烘烤2h。 (7)用0．01mol/L PB，pH8．2洗涤3次，每次15min。 (8)将与胶体金相连的链霉