核酸内切酶 III（Nth）

核酸内切酶 III（Nth）产品及特点：

E. coli 核酸内切酶 III (Nth) 既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性，占E.coliAP酶总活性的90%。N-糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶 (AP) 位点。AP-裂解酶活性则切割 AP 位点的 3 端，产生一个 5 磷酸和一个3 磷酸-α,β不饱和醛。被核酸内切酶 III 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6 二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二羟基胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲。其反应示意图如下：

具体有下列特点：

1. 单细胞凝胶电泳 (彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1：104～1：105

2. 碱性析出

3. 碱解旋

核酸内切酶 III（Nth）反应条件

1X Endonuclease III (Nth) 反应缓冲液 [20 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，1mM DTT (pH 8.0 @ 25℃) ]， 37℃ 温育。

单位定义

1 单位指在 10 μl 缓冲液体系中，37℃ 条件下，1 小时内能够切割 1 pmol 含一个 AP 位点*的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。 AP 位点的创建方法如下：37℃条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UDG)处理 10 pmol 含单一尿嘧啶碱基的34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，200 μg/mlBSA，50% Glycerol

热失活

65℃ 20 分钟。