Caspase 9检测试剂盒

Caspase 9检测试剂盒产品及特点：

Caspase（Cysteine-requiring Aspartate Protease）家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用。Caspase 9（ICE-LAP6；Mch6）是细胞凋亡信号转导过程中比较上游的一个Caspase。线粒体释放细胞色素C以后，Caspase 9可以和细胞色素C以及Apaf1形成复合物，同时被激活。激活的Caspase 9可以激活细胞凋亡的最关键酶Caspase 3，从而促进后续的细胞凋亡信号。本产品是基于底物Ac-LEHD-pNA(acetyl-Leu-Glu-His-Asp p-nitroanilide)的Caspase 9分光光度法检测试剂盒，可用于检测细胞或组织裂解液中Caspase 9活性或纯化的Caspase 9活性。

Caspase 9检测试剂盒原理如下：

本产品具有下列特点：

1. 即开即用，不需要花时间准备各种成分，操作简便、快捷、安全，灵敏度高。

2. 适用于培养细胞、新鲜组织等样品的Caspase 9检测。

3.　某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖Caspase 9的机制，此时建议检测其他凋亡信号通路。

4. 与各类型分光光度计和酶标仪兼容，用酶标仪检测或容量不超过100 μL的分光光度检测杯检测时，足够可以检测50个样品。

Caspase 9检测试剂盒使用及效果

裂解样品：

1. 细胞样品 收集3-5×106个细胞，向细胞中加入150-200 μL预冷的溶液A（裂解液，每50 μL溶液A提前加入0.5 μL溶液D），冰上静置20-60 min，期间振荡3-4次。4℃，10000 rpm离心1分钟。转移上清至新离心管，取少量上清测定蛋白浓度（Bradford法）。

2. 组织样品 取50-100 mg组织样品，剪碎至3mm×3mm大小，加入150-200μL预冷的溶液A（每50 μL溶液A提前加入0.5 μL溶液D），匀浆器匀浆。匀浆液转移至预冷的离心管中，4℃，1000rpm离心5分钟。转移上清至新离心管，取少量上清测定蛋白浓度（Bradford法）。

Caspase 9检测

取50 μL 含100-200 μg蛋白的细胞或组织裂解液上清，体积不足50 μL的，用10mM PBS（pH7.2~pH7.6）补足体积至50 μL。加50 μL溶液B（每50 μL溶液B提前加入0.5 μL溶液D）。加入5 μL溶液C，37℃避光孵育4小时。酶标仪或分光光度计405nm测定吸光值。通过计算OD诱导剂/OD阴性对照的数值来确定凋亡诱导剂组Caspase 9的活化程度。