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BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒优惠促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒优惠促销
产地:国产|进口
规格:100次
英文名:BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit
品牌:百奥莱博
本试剂盒是采用探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时,逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高,荧光信号强,信噪比高,非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效,提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围,对目的基因定量更准确,重复性好,可信度高。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器:(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System,QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器:(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
试剂盒组成:
组份 | WE0148-100次 | WE0149-100次 | WE0150-100次 |
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 1.4ml | 1.4ml | 1.4ml |
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 100μl | 100μl | 100μl |
50×Low ROX | - | 50μl | - |
50×High ROX | - | - | 50μl |
RNase-Free Water | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml |
试剂 | 25μl反应体系 | 终浓度 |
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 12.5μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
Probe,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 1.0μl | |
RNA Template | Xμl | 10 pg~100ng |
50×Low ROX or High ROX(可选) | 0.5μl | 1× |
RNase-Free Water | up to 25μl |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
逆转录 | 45℃ | 10 min | |
PCR预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 95℃ | 15 s | 30-40个循环 |
退火/延伸 | 60℃ | 45 s |
组成 | 50ml | 250ml |
cwECL-A(Luminol) | 25ml | 125ml |
cwECL-B(Peroxide) | 25ml | 125ml |
问题 | 可能原因 | 解决方法 |
胶片反相(白色条带,黑色背景) | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
膜上出现棕色或黄色条带 | ||
暗室中看到强烈发光 | ||
发光信号持续时间过短 | ||
信号较弱或者无信号 | 发光反应系统中HRP 过多,消 耗底物过快,引起信号迅速降低 |
稀释HRP标记物至少10倍以上 |
抗原/抗体量不够 | 增加抗原/抗体使用量 | |
蛋白转移率低 | 优化转移系统 | |
高背景 | 系统中HRP 过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
封闭不足 | 优化封闭程序 | |
封闭试剂选择不当 | 选择另一种封闭试剂 | |
冲洗不充分 | 增加冲洗时间,次数 | |
曝光过度 | 减少曝光时间 | |
抗原/抗体浓度过高 | 降低抗原/抗体使用浓度 | |
蛋白条带为点状 | 蛋白转移失败 | 优化转移过程 |
膜未平衡 | 按照说明书处理膜 | |
胶片与膜之间有气泡 | 曝光前去除所有气泡 | |
出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短) |
系统中HRP过多 | 稀释HRP标记物 |
出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常) |
一抗用量过多 | 进一步稀释一抗 |
SDS 导致非特异结合 | 在实验过程中避免使用SDS |
组份 | 50次 |
Buffer SW | 60ml |
Buffer SL | 30ml |
Buffer GLS | 30ml |
Buffer PR(浓缩液) | 13ml |
Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
Buffer GW2(浓缩液) | 15ml |
Buffer GE | 15ml |
吸附柱DM及收集管 | 50套 |
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒优惠促销。
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