WE0127型全血Taq DNA聚合酶厂家

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应WE0127型全血Taq DNA聚合酶厂家，产品信息：

类别：核酸扩增(PCR)

英文名：BloodTaq DNA Polymerase

产品名	产品编号	包装规格
全血Taq DNA聚合酶	WE0127	2500U

编号：WE0127

产地：国产|进口

英文名：BloodTaq DNA Polymerase

规格：2500U

品牌：百奥莱博

  本品是通过缺失Taq DNA Polymerase N端一段*基酸和突变改造得到的新型DNA聚合酶。通过改造后使本产品能够全血中存在的抑制剂产生耐受作用，能够直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先对基因组进行提取和纯化。PCR产物3’端为A，可直接用于T/A克隆。

 

产品组成：

 

组份	2500U
BloodTaq DNA Polymerase，5 U/μl	5×100μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5×1.8ml

注意： BloodTaq PCR Buffer含有30 mM MgCl2

 

质量控制：

1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；

2、经检测无外源核酸酶活性；

3、PCR方法检测无宿主残余DNA；

4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；

5、室温存放一周，无明显活性改变。

 

使用方法：

1、使用前请将BloodTaq DNA Polymerase反复颠倒至完全混匀。

2、将PCR薄壁管置于冰上，加入除全血外的以下试剂。

 

 

试剂	50μl反应体系	终浓度
BloodTaq DNA Polymerase	1μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	4μl	200μM each
Forward Primer(10μM)	2μl	0.4μM
Reverse Primer(10μM)	2μl	0.4μM
全血	≤10%
RNase-Free water	xμl
Total	50μl

注意：

a.加入全血前反复上下吸打完全混匀各种试剂、

b.DNA模板：可以使用肝素*、Na-EDTA、K-EDTA或柠檬酸*处理全血。通常建议全血含量为5-10%。不推荐使用高浓度血液。对于高GC含量的模板，加入10%DMSO。

c.引物：寡核苷酸引物长度通常含20-30个核苷酸，并且最好GC含量在40-60%并均匀分布于引物中。在常规的PCR反应中，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。

 

3、最后将全血加入管底。

4、PCR反应条件

 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	30 s	35-40 个循环
退火	50-68℃	30 s
延伸	72℃	250-500 bp/min
终延伸	72℃	10 min

注意：

a.PCR仪于94-95℃预热，将样品放置于PCR仪上开始循环。

b.BloodTaq提高了冷敏感性，具备了一些热启动特性。通常可以通过在冰上配制反应成分、最后加入聚合酶以及将热循环仪预热至变性温度(95℃)后立即进行反应来避免非特异性产物的产生。

c.变性温度与时间：在PCR循环前为了充分裂解血液细胞和释放/变性DNA，要求初始变性为95℃ 5分钟。

d.退火温度与时间:退火时间通常为30秒-1分钟。退火温度可以低于理论退火温度(Tm)5℃开始，通过梯度PCR进行优化。

e.延伸时间：延伸反应通常在72℃下进行。一般每250-500 bp延伸时间为1分钟。推荐72℃ 10分钟进行最终延伸。

f.通常35-40个循环可以达到最优扩增。

 

5、结果检测：反应结束后取5μl反应产物并加上电泳缓冲液一起电泳检测结果。

 

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

WE0127型全血Taq DNA聚合酶厂家专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：全血Taq DNA聚合酶,WE0127,BloodTaq DNA Polymerase

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