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- LMAI Bio
- 上海
- LM90801A-20
- 2025年07月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
One-Stop AT Cloning Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
20次
一站式TA克隆试剂盒产品及特点
AT克隆就是利用T载体两个3端各带有一个T突出，而PCR扩增产物两个3端各带有一个A突出的特点，在DNA连接酶的作用下，将PCR产物克隆到T载体中的过程，它是克隆PCR扩增产物的主要手段。其原理如下：
本产品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特点：
1. 一站式，用户只需要准备PCR产物即可进行AT克隆。
2. T载体由Xcm I酶切方法制备，两个5端100%含T突出，自连率几乎为零。
3. 克隆效率高，一次AT克隆实验一般能得到上百个重组子。
4. 阳性率高，一般能到90%以上，大大缩短了筛选工作。
5. 提供供两次实验用的对照插入片段，方便分析实验数据。
6. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点（如Bst ZI、Eco RI、Not I），便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
7. 克隆位点两侧分别有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
9. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
10. 含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。
一站式TA克隆试剂盒使用及效果
将1 μ L载体、1.5 μ L对照插入片段、2 μ L溶液A、1 μ L溶液B混合，加水到10μL，16℃保温30分钟到过夜，65℃5分钟灭活连接酶。取5 μL转化100 μ L感受态细胞即可。涂盘得到的菌落用于提取质粒DNA，用Eco RI酶切质粒，有1.5K插入片段的就是重组子。
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文献和实验PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含
PCR 克隆 主要有TA克隆 法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。 但因为TA克隆 法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR 产物的最佳克隆 方法。TA克隆 法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。 TA克隆 方法（Original TA Cloning Kit
形DNA结构、Holliday结构等，故易出现假阳性；测序耗时长（1-3天），常常出现测序无信号等问题。 今年年初，Genloci通过植物基因工程表达产生高纯度的Cruiser™酶，它是一种具天然强活性的核酸内切酶，与CelⅠ同源。该酶能够高效特异地识别异源双链DNA的突变位点，并从突变位点的3’-端高效地切割异源双链DNA，不会出现假阳性。 今年6月，Genloci推出Cruiser™基因敲除检测试剂盒，该试剂盒可广泛应用于精确检测人、哺乳动物、细菌、真菌、病毒以及植物基因的敲除，尤其适用于ZFN
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