PS Capture™ 外泌体流式试剂盒

PS Capture™ 外泌体流式试剂盒

　　本产品是通过运用磷酯酰丝氨酸（PS）特异性结合的Tim4蛋白质和磁珠的新型亲和法，可将细胞外囊泡捕获到磁珠上面，通过流式细胞仪高灵敏度检测表面标记蛋白的试剂盒。无需从细胞培养上清和体液检体中提取细胞外囊泡，即可直接定性分析表面标记蛋白。

　　使用前请准备好各表面标记蛋白对应一抗和荧光素标记的二抗或荧光素标记的一抗。 

 

◆检测方法

 

 

◆试剂盒内容

试剂盒组成（300次用）	容量
外泌体捕捉磁珠	3mL×1支
洗脱缓冲液（10×）	45mL×2支
外泌体结合增强剂（100×）	15mL×1支

 

K562细胞培养上清所含外泌体表面抗原分析 

用本产品或其他公司产品（抗CD81、CD9、CD63抗体固化磁珠）固定K562细胞培养上清所含外泌体，与荧光标记抗CD63、CD9、CD81抗体结合后，通过流式细胞仪分析外泌体表面抗原。 

 

 

 

　　上述检测抗体均表明，本产品比其他公司产品检测外泌体表面抗原的灵敏度更高。

 

◆相关产品

　　COLO201细胞培养上清、人血清、人血浆（EDTA血浆、肝素血浆）所含外泌体表面抗原的分析

　　利用本产品对COLO201细胞培养上清、人血清、人血浆（EDTA血浆、肝素血浆）的外泌体进行固定，通过PE标记小鼠IgG同型对照或PE标记抗人CD9抗体对外泌体进行检测。 

 

 

●　样品：COLO201培养上清、人血清、人血浆（EDTA血浆、肝素血浆）各100μL

●　检测抗体：PE标记抗CD9抗体

　　全部样品通过PE标记抗人CD9抗体染色，都可确认到荧光强度峰值的变化。从该结果可判断，本产品可以检测出细胞培养上清、血清、血浆中的外泌体。

 

产品编号	产品名称	产品规格
297-79701	PS   Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit PS   Capture™外泌体流式试剂盒	300次用

 

◆PS亲合法

　　通过使用T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白域包含蛋白4（Tim4）分离高度纯化的外泌体。Tim4是在巨噬细胞上表达的I型跨膜蛋白，其强烈结合磷脂酰丝氨酸，不仅显示在凋亡细胞上，而且显示在外泌体和微泡。使用Tim4蛋白，其特异性结合显示在外泌体表面上的磷脂酰丝氨酸。因为结合是Ca2+依赖性的，完整的外泌体可以通过添加Ca2+螯合剂容易地从Tim 4释放。值得注意的是，利用PS亲和法提取的外泌体纯度之高可以用过质谱显示的。还用于从细胞条件培养基沉淀中分离大外泌体和通过ELISA、流式细胞术对外泌体的灵敏定量。这些结果表明通过Tim4蛋白纯化的有用性表征Evs的真正功能。

（Wataru Nakai, Takeshi Yoshida, Diego Diez etl.A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles[J]Nature, Scientific Reports 6, Article number: 33935 (2016). doi:10.1038/srep33935）

 

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◆操作流程

样品制备流程（步骤1）

 

 

 

外泌体捕获固定流程（步骤2）

 

 

亲和提取流程（步骤3-5）

 

 

外泌体提取血浆样品前处理步骤

使用TBS缓冲液进行缓冲液交换

1、向VIVASPIN 20（100K）中添加19ml TBS缓冲液。

2、将1ml血浆添加到（步骤1）的VIVASPIN 20（100K）中并混合。

3、离心（步骤2）中的VIVASPIN 20（100K）。 （离心条件参考使用说明书）

4、当上层液体下降时，添加10ml TBS缓冲液到（步骤3）的VIVASPIN 20（100K）中。

5、离心。

6、当上层液体下降时，添加10ml TBS缓冲液到（步骤5）的VIVASPIN 20（100K）中。

7、离心。

8、当上层液体下降时，添加11ml TBS缓冲液到（步骤7）的VIVASPIN 20（100K）中。

9、离心VIVASPIN 20（100K），直到样品体积变为1ml。

 

该方案共计使用50ml的TBS缓冲液。