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- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
pCMV-Tag 5B
- 库存:
大量
- 供应商:
钰博生物
- 规格:
1ug/5ug
pCMV-Tag5B载体基本信息
| 出品公司: | Ybscience |
|---|---|
| 载体名称: | |
| 质粒类型: | pCMV-Tag 5B 、pCMV-Tag5B |
| 高拷贝/低拷贝: | 哺乳动物表达载体 |
| 克隆方法: | 高拷贝 |
| 多克隆位点;限制性内切酶 | |
| 启动子: | CMV |
| 载体大小: | 4323 bp |
| 5' 测序引物及序列: | CMV Forward:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | c-myc tag (C-末端) |
| 载体抗性: | 卡那霉素 |
| 筛选标记: | Neomycin |
| 克隆菌株: | XL1-Blue |
| 宿主细胞(系): | -- |
| 备注: | c-myc标签含10个氨基酸残基(EQKLISEEDL); CMV启动子驱动目的蛋白的高水平表达; pCMV-Tag 5A,B,C的差别仅在于读码框(阅读框)处。 |
| 稳定性: | 瞬表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
pCMV-Tag5B载体质粒图谱和多克隆位点信息



pCMV-Tag5B载体简介
ADDITIONAL MATERIALS REQUIRED T4 DNA ligase Taq DNA polymerase Taq DNA polymerase buffer TE buffer CIAP Falcon 2059 polypropylene tubes (15-ml) Water baths (37°C and 42°C) XL1-Blue Genotype: recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 relA1 lac [F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)]. The XL1-Blue cells supplied with the pCMV-Tag vectors are not competent cells. Refer to Hanahan (1983) for a protocol for producing competent cells.
pCMV-Tag5B载体序列
LOCUS pCMV-Tag 5B 4323 bp DNA SYN
DEFINITION pCMV-Tag 5B
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4323
/organism="pCMV-Tag 5B"
/mol_type="other DNA"
promoter 16..568
/label="CMV_immearly_promoter"
misc_feature 71..358
/label="CAG_enhancer"
misc_feature 525..545
/label="CMV_fwd_primer"
promoter 526..595
/label="CMV_promoter"
promoter 620..639
/label="T3_promoter"
promoter complement(825..843)
/label="T7_promoter"
misc_feature 900..959
/label="SV40_3_splice"
terminator 1010..1238
/label="SV40_PA_terminator"
misc_feature 1208..1227
/label="EBV_rev_primer"
rep_origin complement(1377..1683)
/label="f1_origin"
promoter 1762..1790
/label="AmpR_promoter"
misc_feature complement(1856..1876)
/label="pBABE_3_primer"
misc_feature complement(1862..2077)
/label="SV40_enhancer"
promoter 1874..2142
/label="SV40_promoter"
rep_origin 2041..2118
/label="SV40_origin"
misc_feature 2103..2122
/label="SV40pro_F_primer"
CDS 2225..3019
/label="ORF frame 2"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGR
PVLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDL
LSSHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDE
EHQGLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRY
QDIALATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF*"
gene 2228..3016
/label="NeoR/KanR (variant)"
/gene="NeoR/KanR (variant)"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGR
PVLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDL
LSSHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDE
EHQGLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRY
QDIALATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF*"
CDS complement(2534..3070)
/label="ORF frame 3"
/translation="MAGWASLGRSFRTPESRSEELVKKAIEGDALRIGSGDTVKHEEA
VSPFAAKFFSNITGSQRYVLIAVRHTQPATVDESRKAAIFHHDIRQAGIAMGHDEILA
VGHARLEPGEQFGWREPLMFFVQIILIDKTGFHPSTCSLDAMFRLVVEWAGSRIKRMQ
PPHCISHDGYFLGRSKVR*"
terminator 3194..3463
/label="TK_PA_terminator"
/translation="MAGWASLGRSFRTPESRSEELVKKAIEGDALRIGSGDTVKHEEA
VSPFAAKFFSNITGSQRYVLIAVRHTQPATVDESRKAAIFHHDIRQAGIAMGHDEILA
VGHARLEPGEQFGWREPLMFFVQIILIDKTGFHPSTCSLDAMFRLVVEWAGSRIKRMQ
PPHCISHDGYFLGRSKVR*"
rep_origin 3611..4230
/label="pBR322_origin"
/translation="MAGWASLGRSFRTPESRSEELVKKAIEGDALRIGSGDTVKHEEA
VSPFAAKFFSNITGSQRYVLIAVRHTQPATVDESRKAAIFHHDIRQAGIAMGHDEILA
VGHARLEPGEQFGWREPLMFFVQIILIDKTGFHPSTCSLDAMFRLVVEWAGSRIKRMQ
PPHCISHDGYFLGRSKVR*"
ORIGIN
1 ATGCATTAGT TATTAATAGT AATCAATTAC GGGGTCATTA GTTCATAGCC CATATATGGA
61 GTTCCGCGTT ACATAACTTA CGGTAAATGG CCCGCCTGGC TGACCGCCCA ACGACCCCCG
121 CCCATTGACG TCAATAATGA CGTATGTTCC CATAGTAACG CCAATAGGGA CTTTCCATTG
181 ACGTCAATGG GTGGAGTATT TACGGTAAAC TGCCCACTTG GCAGTACATC AAGTGTATCA
241 TATGCCAAGT ACGCCCCCTA TTGACGTCAA TGACGGTAAA TGGCCCGCCT GGCATTATGC
301 CCAGTACATG ACCTTATGGG ACTTTCCTAC TTGGCAGTAC ATCTACGTAT TAGTCATCGC
361 TATTACCATG GTGATGCGGT TTTGGCAGTA CATCAATGGG CGTGGATAGC GGTTTGACTC
421 ACGGGGATTT CCAAGTCTCC ACCCCATTGA CGTCAATGGG AGTTTGTTTT GGCACCAAAA
481 TCAACGGGAC TTTCCAAAAT GTCGTAACAA CTCCGCCCCA TTGACGCAAA TGGGCGGTAG
541 GCGTGTACGG TGGGAGGTCT ATATAAGCAG AGCTGGTTTA GTGAACCGTC AGATCCGCTA
601 GCGATTACGC CAAGCTCGAA ATTAACCCTC ACTAAAGGGA ACAAAAGCTG GAGCTCCACC
661 GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCCCCGGGCT GCAGGAATTC GATATCAAGC
721 TTATCGATAC CGTCGACACT CGAGCAGAAA CTCATCTCTG AAGAGGATCT GTAGGGCCCG
781 GTACCTTAAT TAATTAAGGT ACCAGGTAAG TGTACCCAAT TCGCCCTATA GTGAGTCGTA
841 TTACAATTCA CTCGATCGCC CTTCCCAACA GTTGCGCAGC CTGAATGGCG AATGGAGATC
901 CAATTTTTAA GTGTATAATG TGTTAAACTA CTGATTCTAA TTGTTTGTGT ATTTTAGATT
961 CACAGTCCCA AGGCTCATTT CAGGCCCCTC AGTCCTCACA GTCTGTTCAT GATCATAATC
1021 AGCCATACCA CATTTGTAGA GGTTTTACTT GCTTTAAAAA ACCTCCCACA CCTCCCCCTG
1081 AACCTGAAAC ATAAAATGAA TGCAATTGTT GTTGTTAACT TGTTTATTGC AGCTTATAAT
1141 GGTTACAAAT AAAGCAATAG CATCACAAAT TTCACAAATA AAGCATTTTT TTCACTGCAT
1201 TCTAGTTGTG GTTTGTCCAA ACTCATCAAT GTATCTTAAC GCGTAAATTG TAAGCGTTAA
1261 TATTTTGTTA AAATTCGCGT TAAATTTTTG TTAAATCAGC TCATTTTTTA ACCAATAGGC
1321 CGAAATCGGC AAAATCCCTT ATAAATCAAA AGAATAGACC GAGATAGGGT TGAGTGTTGT
1381 TCCAGTTTGG AACAAGAGTC CACTATTAAA GAACGTGGAC TCCAACGTCA AAGGGCGAAA
1441 AACCGTCTAT CAGGGCGATG GCCCACTACG TGAACCATCA CCCTAATCAA GTTTTTTGGG
1501 GTCGAGGTGC CGTAAAGCAC TAAATCGGAA CCCTAAAGGG AGCCCCCGAT TTAGAGCTTG
1561 ACGGGGAAAG CCGGCGAACG TGGCGAGAAA GGAAGGGAAG AAAGCGAAAG GAGCGGGCGC
1621 TAGGGCGCTG GCAAGTGTAG CGGTCACGCT GCGCGTAACC ACCACACCCG CCGCGCTTAA
1681 TGCGCCGCTA CAGGGCGCGT CAGGTGGCAC TTTTCGGGGA AATGTGCGCG GAACCCCTAT
1741 TTGTTTATTT TTCTAAATAC ATTCAAATAT GTATCCGCTC ATGAGACAAT AACCCTGATA
1801 AATGCTTCAA TAATATTGAA AAAGGAAGAA TCCTGAGGCG GAAAGAACCA GCTGTGGAAT
1861 GTGTGTCAGT TAGGGTGTGG AAAGTCCCCA GGCTCCCCAG CAGGCAGAAG TATGCAAAGC
1921 ATGCATCTCA ATTAGTCAGC AACCAGGTGT GGAAAGTCCC CAGGCTCCCC AGCAGGCAGA
1981 AGTATGCAAA GCATGCATCT CAATTAGTCA GCAACCATAG TCCCGCCCCT AACTCCGCCC
2041 ATCCCGCCCC TAACTCCGCC CAGTTCCGCC CATTCTCCGC CCCATGGCTG ACTAATTTTT
2101 TTTATTTATG CAGAGGCCGA GGCCGCCTCG GCCTCTGAGC TATTCCAGAA GTAGTGAGGA
2161 GGCTTTTTTG GAGGCCTAGG CTTTTGCAAA GATCGATCAA GAGACAGGAT GAGGATCGTT
2221 TCGCATGATT GAACAAGATG GATTGCACGC AGGTTCTCCG GCCGCTTGGG TGGAGAGGCT
2281 ATTCGGCTAT GACTGGGCAC AACAGACAAT CGGCTGCTCT GATGCCGCCG TGTTCCGGCT
2341 GTCAGCGCAG GGGCGCCCGG TTCTTTTTGT CAAGACCGAC CTGTCCGGTG CCCTGAATGA
2401 ACTGCAAGAC GAGGCAGCGC GGCTATCGTG GCTGGCCACG ACGGGCGTTC CTTGCGCAGC
2461 TGTGCTCGAC GTTGTCACTG AAGCGGGAAG GGACTGGCTG CTATTGGGCG AAGTGCCGGG
2521 GCAGGATCTC CTGTCATCTC ACCTTGCTCC TGCCGAGAAA GTATCCATCA TGGCTGATGC
2581 AATGCGGCGG CTGCATACGC TTGATCCGGC TACCTGCCCA TTCGACCACC AAGCGAAACA
2641 TCGCATCGAG CGAGCACGTA CTCGGATGGA AGCCGGTCTT GTCGATCAGG ATGATCTGGA
2701 CGAAGAACAT CAGGGGCTCG CGCCAGCCGA ACTGTTCGCC AGGCTCAAGG CGAGCATGCC
2761 CGACGGCGAG GATCTCGTCG TGACCCATGG CGATGCCTGC TTGCCGAATA TCATGGTGGA
2821 AAATGGCCGC TTTTCTGGAT TCATCGACTG TGGCCGGCTG GGTGTGGCGG ACCGCTATCA
2881 GGACATAGCG TTGGCTACCC GTGATATTGC TGAAGAACTT GGCGGCGAAT GGGCTGACCG
2941 CTTCCTCGTG CTTTACGGTA TCGCCGCTCC CGATTCGCAG CGCATCGCCT TCTATCGCCT
3001 TCTTGACGAG TTCTTCTGAG CGGGACTCTG GGGTTCGAAA TGACCGACCA AGCGACGCCC
3061 AACCTGCCAT CACGAGATTT CGATTCCACC GCCGCCTTCT ATGAAAGGTT GGGCTTCGGA
3121 ATCGTTTTCC GGGACGCCGG CTGGATGATC CTCCAGCGCG GGGATCTCAT GCTGGAGTTC
3181 TTCGCCCACC CTAGGGGGAG GCTAACTGAA ACACGGAAGG AGACAATACC GGAAGGAACC
3241 CGCGCTATGA CGGCAATAAA AAGACAGAAT AAAACGCACG GTGTTGGGTC GTTTGTTCAT
3301 AAACGCGGGG TTCGGTCCCA GGGCTGGCAC TCTGTCGATA CCCCACCGAG ACCCCATTGG
3361 GGCCAATACG CCCGCGTTTC TTCCTTTTCC CCACCCCACC CCCCAAGTTC GGGTGAAGGC
3421 CCAGGGCTCG CAGCCAACGT CGGGGCGGCA GGCCCTGCCA TAGCCTCAGG TTACTCATAT
3481 ATACTTTAGA TTGATTTAAA ACTTCATTTT TAATTTAAAA GGATCTAGGT GAAGATCCTT
3541 TTTGATAATC TCATGACCAA AATCCCTTAA CGTGAGTTTT CGTTCCACTG AGCGTCAGAC
3601 CCCGTAGAAA AGATCAAAGG ATCTTCTTGA GATCCTTTTT TTCTGCGCGT AATCTGCTGC
3661 TTGCAAACAA AAAAACCACC GCTACCAGCG GTGGTTTGTT TGCCGGATCA AGAGCTACCA
3721 ACTCTTTTTC CGAAGGTAAC TGGCTTCAGC AGAGCGCAGA TACCAAATAC TGTCCTTCTA
3781 GTGTAGCCGT AGTTAGGCCA CCACTTCAAG AACTCTGTAG CACCGCCTAC ATACCTCGCT
3841 CTGCTAATCC TGTTACCAGT GGCTGCTGCC AGTGGCGATA AGTCGTGTCT TACCGGGTTG
3901 GACTCAAGAC GATAGTTACC GGATAAGGCG CAGCGGTCGG GCTGAACGGG GGGTTCGTGC
3961 ACACAGCCCA GCTTGGAGCG AACGACCTAC ACCGAACTGA GATACCTACA GCGTGAGCTA
4021 TGAGAAAGCG CCACGCTTCC CGAAGGGAGA AAGGCGGACA GGTATCCGGT AAGCGGCAGG
4081 GTCGGAACAG GAGAGCGCAC GAGGGAGCTT CCAGGGGGAA ACGCCTGGTA TCTTTATAGT
4141 CCTGTCGGGT TTCGCCACCT CTGACTTGAG CGTCGATTTT TGTGATGCTC GTCAGGGGGG
4201 CGGAGCCTAT GGAAAAACGC CAGCAACGCG GCCTTTTTAC GGTTCCTGGC CTTTTGCTGG
4261 CCTTTTGCTC ACATGTTCTT TCCTGCGTTA TCCCCTGATT CTGTGGATAA CCGTATTACC
4321 GCC
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文献和实验质,小分子或是金属。当融合有亲和标签的蛋白通过标签-配体作用结合再层析基质上时,通过洗杂步骤,即可去除掉其他的细胞成分。 为了洗脱所需要的蛋白质,通过改变缓冲液的条件,如pH,或通过竞争亲和标签和配体连接的方法来进行。 但怎样的纯化是较为成功的呢?仅达到所需的质量量级,如毫克级(或克级)即可满足吗? 这些并不简单。质在蛋白纯化中同样尤为重要,比如,就蛋白的生物活性和纯度而言,通常会有所要求。 以下我们来讨论并且比较2种技术: His-tag系统和Strep-tag®系统,都使用了亲和层析法来纯化
Strep-tag®技术是亲和纯化重组蛋白的常用工具,它基于自然界中最强的非共价相互作用之一,即生物素与链霉亲和素的相互作用。该纯化系统的突出特点是纯化过程温和、目的蛋白纯度高、特异性强、兼容多种表达系统,对于有挑战性蛋白的纯化十分有帮助,因此近些年来脱颖而出。 本文将从以下方面介绍Strep-tag®技术: 标签介绍 纯化原理 标签-配体 纯化步骤 系统特点 标签介绍 目前有2种广泛使用的Strep标签: 它们分别是: Strep-tag®II 8 aa小标签(Trp-Ser
1. CUT&Tag 适用于什么物种?如果需要做植物 CUT&Tag ,需要怎么操作? CUT&Tag 适用于哺乳动物细胞的蛋白-DNA 互作研究,酵母、植物等细胞需要经过(破除细胞壁或者提取细胞核)来进行实验。CUT&Tag 在哺乳动物细胞系上的应用比较成熟,动物组织经过处理得到悬浮单个细胞同样可以进行实验。植物进行 CUT&Tag 操作可以参照 Low-input chromatin profiling in Arabidopsis
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