pYES2-EGFP酵母表达载体

甲醇酵母表达载体及其元件

P.Pastoris表达载体及其元件由于甲醇营养型酵母菌体内无天然质粒，所以携带外源基因的重组体必须整合于染色体中才能实现外源基因的表达。整合表达的优点在于保持外源基因稳定性并可产生多拷贝基因。典型的毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列，主要的结构包括：5’AOX1启动子片段、多克隆位点(MCS)、转录终止和polyA形成基因序列(TT)、筛选标记(His4或 Zeocin)、3’AOX1基因片段，作为一个能在大肠杆菌中繁殖扩增的穿梭质粒，它还有部分pBR322质粒或COLE1序列

酵母表达载体的构建与酵母转化

实验步骤   1. 酵母表达载体的构建     1) 用引物扩增目的基因全长片段，将它克隆到pGEM-T Easy载体上，转化大肠杆菌DH5α，分别获得阳性克隆；     2) 提取酵母表达载体pYES2和目的片段的质粒；     3) 用EcoR I和Not I双酶切pYES2载体和连有各目的片段的pGEM-T Easy载体；     4) 琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段；     5) 回收目的

核基质结合区修饰的附着体载体介导的EGFP基因体外表达

-MEM、DMEM培养基和M-MLV逆转录酶；小牛血清；G418；DIG High PrimeDNA Labeling and Detection Starter Kit I1。 质粒 pGL3-promoter；含EBVR的质粒p220.2。 重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR的构建 采用StuI和XbaI消化p220.2，获得长4.7 kb的EBVR，包括EBV核抗原1(EBNA1)和OriP，克隆至pGL3-promotor的SV40启动子下游Hind Ill